ＣＲＩＳＰＲ／Ｃａｓ９封入高分子集合体の構築と生体内デリバリーへの挑戦

CRISPR/Cas9 封装的聚合物组装体的构建和体内递送的挑战

• 批准号: 16F16355
• 负责人: 宮田 完二郎
• 金额: $ 1.41万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-10-07 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16F16355/
• 关键词: Cas9; messenger RNA delivery; polyplex; polymeric micelle; Muscular dystrophy; amphiphilic polymer; 薬物送達システム; CRISPR

Cas9 activities of various cationic polymers were evaluated by luciferase-based Cas9 activity system. This assay consists of three different plasmids - sgRNA-expressing plasmid, Stop codon-contained luciferase-expressing plasmid, and luciferase donor DNA plasmid, which were kindly donated by Professor Moritoshi Sato (UTokyo). A cationic polymer (PAsp(OCT/DET)) was complexed with Cas9 messenger RNA and then the resulting polyplexes were transfected into human cervical cancer (HeLa) cells. The Cas9 activities were measured by a luminescence microplate reader. The cationic polymer elicited the similar luminescence intensity compared to commercially available transfection agent, lipofectamine 3000. This result indicates that the new cationic polymer is promising for in vitro Cas9 mRNA transfection.

通过基于内切酶的Cas9活性系统评估各种阳离子聚合物的Cas9活性。本试验由三种不同的质粒组成-sgRNA表达质粒、含终止密码子的内切酶表达质粒和荧光素酶供体DNA质粒，由Moritoshi Sato教授（东京大学）捐赠。将阳离子聚合物（PAsp（OCT/DET））与Cas9信使RNA复合，然后将所得的聚合复合物转染到人宫颈癌（HeLa）细胞中。通过发光酶标仪测量Cas9活性。阳离子聚合物引起类似的发光强度相比，市售的转染剂，lipofectamine 3000。该结果表明，新的阳离子聚合物有希望用于体外Cas9 mRNA转染。

项目成果

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Development of smart polymeric nanocarriers for targeted siRNA delivery

开发用于靶向 siRNA 递送的智能聚合物纳米载体

• 发表时间: 2016
• 作者: 宮田完二郎;他;K. Miyata
• 通讯作者: K. Miyata

リガンド搭載高分子ミセルの構築と核酸医薬デリバリーへの展開

负载配体的聚合物胶束的构建及其在核酸药物递送中的应用

• 发表时间: 2018
• 作者: 宮田完二郎;H. -S. Min;Y. Yi;内藤瑞;H. -J. Kim;片岡一則
• 通讯作者: 片岡一則

Polymer-based oligonucleotide delivery ~challenges and solutions~

基于聚合物的寡核苷酸递送〜挑战和解决方案〜

• 发表时间: 2017
• 作者: Hyun Jin Kim;Takehiko Ishii;Meng Zheng;Sumiyo Watanabe;Kazuko Toh;Yu Matsumoto;Nobuhiro Nishiyama;Kanjiro Miyata;Kazunori Kataoka;K. Miyata
• 通讯作者: K. Miyata

高分子・無機材料を用いたナノ構造体の創製と核酸医薬デリバリーへの応用

使用聚合物和无机材料创建纳米结构及其在核酸药物输送中的应用

• 发表时间: 2017
• 作者: Yanlei Gu;Li-Ta Hsu;Shunsuke Kamijo;小谷健太，Deepak RAJ BHAT，若井明彦;宮田完二郎
• 通讯作者: 宮田完二郎