組織球・樹状細胞系腫瘍モデル構築にもとづく疾患関連遺伝子の探索

基于组织细胞/树突状细胞肿瘤模型构建寻找疾病相关基因

• 批准号: 16J02129
• 负责人: 小林 真之
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2018-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J02129/
• 关键词: ランゲルハンス細胞組織球症; マウスモデル; ゲノム解析; cell free DNA; 樹状細胞

近年、ランゲルハンス細胞組織球症（LCH）に代表される組織球・樹状細胞系腫瘍について次世代シークエンサーを用いた網羅的ゲノム解析が試みられており、LCHでは過半数例でBRAF-V600Eを始めとしたMAPキナーゼ経路の遺伝子異常が報告されている。しかしながらLCHは生検困難な部位に好発し、また炎症性細胞浸潤が強く病変組織における腫瘍占拠率が低い等の理由から臨床検体を用いた病態解析は困難となっており、未だ発症に至る機序は解明されていない。本研究は、組織球・樹状細胞系腫瘍のヒト化疾患モデルマウスを樹立し、移植前の細胞集団や発症後の腫瘍を網羅的に解析することでBRAF-V600Eと協調して腫瘍化に働く候補遺伝子を見つけだすことを主目的としている。まず、前年度に臨床検体からの次世代シークエンス解析で同定したLCH発症に寄与する可能性が考えられたPIK3CD変異の評価を行った。同定した変異をクローニングして作成したレトロウイルスベクターを用いてBa/F3（マウスpro-B細胞）に導入し、野生型を導入した細胞と増殖速度や生存率を比較したがいずれも有意な差は確認できなかった。また形態学的にも有意な差を認めなかった。また、前年度作成したレトロウイルスベクターによって得たBRAF-V600EウイルスとFLuc-EGFPキメラ分子を発現するウイルスをヒト臍帯血由来CD34陽性細胞に共感染させ、in vitro／in vivoいずれにおいてもモニター可能となるよう標識した。この感染細胞を短期間GM-CSFとSCFで刺激したのちNOGマウスへ移植した。移植からおよそ一ヶ月後の段階では腫瘍発症は確認できていない。今後も引き続きマウスの観察を継続するとともに、発症に至らない場合は条件検討を重ねていきたい。

近年来，已经尝试了使用下一代测序仪的组织细胞和树突状细胞系肿瘤（例如Langerhans细胞组织细胞增多症（LCH））的全面基因组分析，在包括BRAF-V600E在内的MAP激酶途径中，大多数情况下，在大多数情况下，都已经在MAP激酶途径中进行了基因异常。然而，在困难的活检的地区通常发现LCH，并且由于炎症细胞的强烈浸润和受影响组织的肿瘤占用率低，因此使用临床标本的病理分析很困难，并且尚未阐明导致发病的机制。这项研究主要旨在建立组织细胞和树突状细胞系肿瘤的人性化疾病模型，并通过与BRAF-V600E合作，通过在植入和结发肿瘤之前全面分析细胞种群来找到与BRAF-V600E合作在肿瘤发生中起作用的候选基因。首先，我们评估了上一年从临床标本的下一代测序分析中鉴定出的PIK3CD突变，这被认为有可能有助于LCH的发作。将鉴定的突变克隆并引入BA/F3（小鼠Pro-B细胞），并将生长速率和存活率与野生型细胞引入的细胞进行比较，但在任何一种情况下均未确认明显的差异。此外，未观察到显着的形态差异。此外，上一年创建的逆转录病毒载体获得的BRAF-V600E病毒和表达FLUC-EGFP嵌合分子的病毒与人脐带血的CD34阳性细胞共感染，并标记为可以在体外和体内监测以允许监测。用GM-CSF和SCF刺激感染的细胞短时间，然后将其移植到NOG小鼠中。移植后大约一个月，尚未确认肿瘤发育。我们将来将继续观察小鼠，如果疾病不发展，将继续检查情况。

项目成果

Cancer progression by reprogrammed BCAA metabolism in myeloid leukaemia.

• DOI: 10.1038/nature22314
• 发表时间: 2017-05-25
• 期刊: Nature
• 影响因子: 64.8
• 作者: Hattori A;Tsunoda M;Konuma T;Kobayashi M;Nagy T;Glushka J;Tayyari F;McSkimming D;Kannan N;Tojo A;Edison AS;Ito T
• 通讯作者: Ito T

Personalized ctDNA dynamically predict treatment response and relapse in hematological malignancies.

个性化 ctDNA 动态预测血液恶性肿瘤的治疗反应和复发。

• 发表时间: 2017
• 作者: Sousuke Nakamura;Kazuaki Yokoyama;Nozomi Yusa;Asako Kobayashi;Mika Ito;Masayuki Kobayashi;et al
• 通讯作者: et al

Clinical profile and BRAF status of adult Langerhans cell histiocytosis in a single institution

单一机构成人朗格汉斯细胞组织细胞增多症的临床概况和 BRAF 状态

• 发表时间: 2016
• 作者: Miyamae;R. & Atsumi;T;小川弥穂・小林真之・竹田玲奈・越智清純・武井智美・川俣豊隆・横山和明・大野伸広・高橋聡・内丸薫・東條有伸
• 通讯作者: 小川弥穂・小林真之・竹田玲奈・越智清純・武井智美・川俣豊隆・横山和明・大野伸広・高橋聡・内丸薫・東條有伸

Personalized Circulating Tumor DNA Predicts Relapse after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation in Acute Myeloid Leukemia and Myelodysplastic Syndrome.

个性化循环肿瘤 DNA 可预测急性髓系白血病和骨髓增生异常综合征异基因造血干细胞移植后的复发。

• 发表时间: 2017
• 作者: Sousuke Nakamura;Kazuaki Yokoyama;Nozomi Yusa;Miho Ogawa;Tomomi Takei;Asako Kobayashi;Mika Ito;Masayuki Kobayashi;et al
• 通讯作者: et al

Autologous peripheral blood stem cell transplantation for double-refractory myeloma with <i>K-RAS</i> and <i>N-RAS</i> mutations

自体外周血干细胞移植治疗<i>K-RAS</i>和<i>N-RAS</i>突变双难治性骨髓瘤

• DOI: 10.11406/rinketsu.58.2380
• 发表时间: 2017
• 期刊: Rinsho Ketsueki
• 作者: 神保光児;横山和明;小川弥穂;平野光人;越智清純;小林真之;遊佐 希;清水英悟;川俣豊隆;大野伸広;山口 類;井元清哉;古川洋一;宮野 悟;今井陽一;東條有伸.
• 通讯作者: 東條有伸.