有糸分裂を乗り越えて遺伝子発現パターンを復元する転写制御機構の解明

阐明有丝分裂后恢复基因表达模式的转录控制机制

• 批准号: 16J04091
• 负责人: 鈴木 秀文
• 金额: $ 3.33万
• 依托单位: Tokyo Institute of Technology
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2016
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2016-04-22 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-16J04091/
• 关键词: M期遺伝子発現制御; in situ ビオチン標識; 遺伝子発現; 有糸分裂; 細胞同調; ES細胞

海外の研究グループから類似した研究成果が報告されたことを受けて、研究計画を一部変更した。今年度は、M期遺伝子発現制御を解明するための新規の解析手法の開発に努めた。本解析手法では、抗体を用いて目的タンパク質近傍20nmをin situビオチン化標識した後ストレプトアビジン精製することによって、目的タンパク質近傍のタンパク質、DNA、RNAを網羅的に同定することができる。本解析手法の確立のためには、抗体由来のバックグラウンドの低減、ビオチン化標識反応条件の最適化、ストレプトアビジン精製の最適化などの様々な条件を検討する必要があったが、それぞれについて最適であると考えられる条件を見つけ、新規手法の確立に大きく近づくことができた。目的タンパク質近傍が特異的にビオチン標識できているかどうかは、蛍光標識ストレプトアビジンを用いて細胞内のビオチン化部位を蛍光顕微鏡観察することで調べた。目的タンパク質の周辺因子が特異的に回収できていることは、ウエスタンブロッティングで調べた。さらに、周辺のDNAおよびRNAが特異的に回収されていることはPCRによって示した。本手法によって得られたタンパク質、DNA、RNAを質量分析と次世代シーケンサーによって解析することで、有糸分裂期特異的な未知のタンパク質-タンパク質相互作用、タンパク質-DNA相互作用、タンパク質-RNA相互作用を明らかにできる。

Overseas study の グ ル ー プ か ら similar し た research report が さ れ た こ と を by け て, research projects を a - more し た. This year, the <s:1> and M phases of 伝 have issued plans to clarify the を and するため regulations, as well as the analysis methods, to develop に efforts めた. This analytical technique で は, antibody を い て purpose タ ン パ ク mass near alongside 20 nm を in situ ビ オ チ ン change logo し た after ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン refined す る こ と に よ っ て, purpose タ ン パ ク mass near alongside の タ ン パ ク qualitative, DNA, RNA を snare に be す る こ と が で き る. This analytical technique の establish の た め に は, antibody origin の バ ッ ク グ ラ ウ ン ド の is low, reduce, ビ オ チ ン の logo anti 応 conditions optimization, ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン refined の optimization な ど の others 々 な conditions を beg す 検 る necessary が あ っ た が, そ れ ぞ れ に つ い て optimum で あ る と exam え ら れ る conditions を see つ け, establishment of new rules on technique の に big き く Near づく とがで た た. Objective タ ン パ ク mass near alongside が specific に ビ オ チ ン logo で き て い る か ど う か は 蛍 light logo ス ト レ プ ト ア ビ ジ ン を with い て in cells の ビ オ チ ン change parts を 蛍 light 顕 micromirror 観 examine す る こ と で adjustable べ た. Objective タ ン パ ク 辺 factor が specific に の weeks returned to 収 で き て い る こ と は, ウ エ ス タ ン ブ ロ ッ テ ィ ン グ で adjustable べ た. さ ら に, zhou 辺 の DNA お よ び RNA が specific に back 収 さ れ て い る こ と は PCR に よ っ て in し た. This technique に よ っ て have ら れ た タ ン パ ク qualitative を quality analysis, DNA, RNA と nextgen シ ー ケ ン サ ー に よ っ て parsing す る こ と で, si divide specific な unknown の タ ン パ ク mass - タ ン パ ク qualitative interaction, タ ン パ ク mass - DNA interaction, タ ン パ ク mass - RNA interaction を Ming ら か に で き る.

项目成果

DNA損傷応答における転写抑制メカニズムとその生理的意義の解析

DNA损伤反应中转录抑制机制及其生理意义分析

• 发表时间: 2017
• 作者: 鈴木 秀文;前田 亮;木村 宏;浦 聖恵;田村 隆明;山口 雄輝
• 通讯作者: 山口 雄輝

DNA損傷時に誘導される転写抑制の生理的意義とTLPの役割

DNA 损伤引起的转录抑制的生理意义和 TLP 的作用

• 发表时间: 2017
• 作者: Nakazato A;Maeda R;Ishikawa K;Suzuki H;Tamura T;鈴木秀文
• 通讯作者: 鈴木秀文

エトポシドによるDNA傷害応答においてTLPは転写を不活性化することで細胞死を誘導する

TLP 通过抑制转录活性来响应依托泊苷诱导的 DNA 损伤，从而诱导细胞死亡

• 发表时间: 2016
• 作者: Sobu Yuriko;Furukori Keiko;Chiba Kyoko;Nairn Angus C.;Kinjo Masataka;Hata Saori;Suzuki Toshiharu;鈴木秀文
• 通讯作者: 鈴木秀文

Ubiquitin-proteasome-dependent degradation of TBP-like protein is prevented by direct binding of TFIIA

TFIIA 的直接结合可防止 TBP 样蛋白的泛素蛋白酶体依赖性降解

• DOI: 10.1111/gtc.12441
• 发表时间: 2016
• 期刊: Genes Cells
• 影响因子: 2.1
• 作者: Isogai M;Suzuki H;Maeda R;Tamura T.
• 通讯作者: Tamura T.

TBP-like protein (TLP) represses myogenesis via inhibition of the myogenin promoter.

TBP 样蛋白 (TLP) 通过抑制肌生成素启动子来抑制肌生成。

• DOI: 10.1016/j.bbrc.2016.09.127
• 发表时间: 2016
• 期刊: Biochem Biophys Res Commun
• 作者: Nakazato A;Maeda R;Ishikawa K;Suzuki H;Tamura T
• 通讯作者: Tamura T