权益分类	功能权益	普通用户	{{item.name}}会员
{{category.name}}	{{benefitItem.name}}

シグナル伝達におけるミトコンドリア動態の時空間的解析―自然免疫系を切り口として

信号转导中线粒体动力学的时空分析——从先天免疫系统的角度

基本信息

批准号：
16J11221
负责人：
出口確
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2016
资助国家：
日本
起止时间：
2016-04-22 至 2019-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

研究項目「ミトコンドリア動態変化のin vivo 時空間的解析」「ミトコンドリア―細胞小器官相互作用のin vivo 時空間的解析」については、当初、細胞内ミトコンドリアを高速液中原子間力顕微鏡により観察する計画であった。しかし、生きた細胞を細胞膜外からの走査で観察可能なミトコンドリアは限られ、解析が極めて困難であると、条件検討の過程で考えるに及んだ。本項目は、MDA5-IPS-1シグナル伝達系の、「後」であるミトコンドリアに着目し、その動態変化を把握することを目指すものだったが、細胞へのウイルス感染過程の初期焦点を当てることとした。具体的には、ウイルスが細胞への侵入に利用する宿主細胞側機構である、エンドサイトーシスを解析の対象とした。エンドサイトーシス進行には、諸タンパク質因子に加え、アクチン骨格と膜張力が重要な役割を担うが、その関連の詳細は明らかになっていない。本研究では、ストレッチチャンバーを用いて細胞膜張力を変化させ、高速液中原子間力顕微鏡でクラスリン依存的エンドサイトーシス（CME)を解析した。細胞の張力を亢進させた場合、開口時間が有意に長くなった。CMEは、200-300 nm の開口（U型）が、数秒-数十秒、100 nm程度の開口（Ω型）となる段階を経て、完全に閉じる段階に至ることが所属研究室の先行研究からわかっている。得られた結果を総合すると、U型からΩ型に遷移する過程は、膜張力依存的だと考えられる。U/Ω型に対応する段階の間には、エネルギー的不連続があるとのin silico の報告があり、膜張力はこの「不連続」を克服する鍵となる要素であると示唆される。現在、より高い時間分解能による観察で得たデータの解析と、この段階の膜変形の責任タンパク質の1つとされるdynaminをノックダウンした細胞の張力を変化させて観察する実験の追加データ取得に取り組んでいる。

The research project "Time-space analysis of the dynamic changes in vivo" and "Time-space analysis of the interactions between small organs and cells in vivo" was carried out under the project of atomic force microscopy in high-speed liquid. The investigation of extracellular membrane of the cell, the detection of possible changes, the analysis of extreme difficulties, and the investigation of the process of conditional analysis This project focuses on the early stages of the infection process of MDA5-IPS-1 cells. The host cell-side mechanisms used to analyze the invasion of cells are described in detail below. The relationship between membrane tension and quality factors is important. In this study, we used Sitoriki to change the tension of cell membranes and analyze the end-user interface (CME) dependent on the interaction between atoms in high-speed liquids using a microscope. Cell tension is increased, and the opening time is intentionally long. CME: 200-300 nm opening (U-shape), several seconds-tens of seconds, 100 nm opening (Ω-shape), completely closed, stage to stage. The results show that the migration process is dependent on membrane tension. The U/Ω type is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the first part is composed of two parts: the second part is composed of two parts: the third part is composed of two parts: the fourth part is composed of two parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of two parts: the fourth part is composed of three parts: the fourth part is composed of four parts: the fourth part is composed Now, the high time decomposition energy can be detected by the analysis of the data, the responsibility of the membrane shape of the stage, the quality of the 1, the dynamic can be detected by the cell tension can be changed, and the additional data can be obtained by the group.