Effect of snare complex zipping during large dense-core vesicle priming and fusion

Exozytose的作用是形成SNARE-Komplex的Vesikel和Plasmamembran，这是一个由四个螺旋构成的结构，由Vesikelprotein Synaptobrevin和Plasmamembran-proteinen SNAP-25和Syntaxin形成。这些建筑物都是由Vesikel和Plamamembran建造的。Laut der 'Zipper'-（de：Reissverschluss-）Hypothese bildet sich der Komplex von den N-terminalen Enden in Richtung der C-terminalen Membranverankerungen von Syntaxin und Synaptobrevin fort，was schließlich zur Membranverschmelzung führt.我正在研究这个假设，我发现了16个疏水的相互作用，这些复杂的相互作用，都是错误的。最重要的是，SNAP-25突变会导致丙氨酸韦尔登产生疏水氨基酸。在SNAP-25-null Mäuse-Chromaffinzellen中的多重蛋白质韦尔登是通过电生理学方法检测的（Kapazitanz- und Kalziummessungen; Amperometrie; photolytische Kalziumfreisetzung）。动力学分析必须通过韦尔登对由前视-再视效应引起的触发效应进行分析。Daddy soll festgestellt韦尔登，obder SNARE-复合物（der Reissverschluffel）sich schon vor or or erst nach dem Kalziumsignal für Exozytose bildet，obein teilweise geforter复合物with dem verschmelzungsreifen（'primed'）Zustand einhergeht，and obdie Bildungsrichtung N- bis C-terminal ist，wie die Hypothese postuliert。电生理学的研究可以通过对多功能蛋白韦尔登的生物化学和理论分子动力学的研究来解决。

Während der Exozytose formt sich zwischen Vesikel und Plasmamembran der sogenannte SNARE-Komplex, ein Bündel aus vier a-Helices, gebildet von dem Vesikelprotein Synaptobrevin und den beiden Plasmamembran-proteinen SNAP-25 und Syntaxin. Dieses Bündel hält damit Vesikel und Plamamembran zusammen. Laut der 'Zipper'- (de: Reissverschluss-) Hypothese bildet sich der Komplex von den N-terminalen Enden in Richtung der C-terminalen Membranverankerungen von Syntaxin und Synaptobrevin fort, was schließlich zur Membranverschmelzung führt. Ich beabsichtige diese Hypothese zu untersuchen, indem ich die 16 hydrophoben Interaktionsschichten, die den Komplex zusammenhalten, gezielt verändere. Dies wird dadurch erreicht, dass durch Mutationen in SNAP-25 in jeder Schicht zwei größere hydrophobe Aminosäuren durch Alanin ersetzt werden. Die mutierten Proteine werden in SNAP-25-null Mäuse-Chromaffinzellen überexpremiert und Exozytose wird mit elektrophysiologischen Methoden untersucht (Kapazitanz- und Kalziummessungen; Amperometrie; photolytische Kalziumfreisetzung). Kinetische Analysen müssen dann durchgeführt werden um Effekte auf die Auslösung der Verschmelzung ('Triggering') von Effekten auf frühere Vesikel-Rekrutierungsschritte zu unterscheiden. Dadurch soll festgestellt werden, ob der SNARE-Komplex (der Reissverschluß) sich schon vor oder erst nach dem Kalziumsignal für Exozytose bildet, ob ein teilweise geformter Komplex mit dem verschmelzungsreifen ('primed') Zustand einhergeht, und ob die Bildungsrichtung N- bis C-terminal ist, wie die Hypothese postuliert. Die elektrophysiologischen Studien sollen durch biochemische und theoretische molekulardynamische Untersuchen der mutierten Proteine ergänzt werden.