環境変化に応答したペプチドの人工制御とその機能に関する研究

肽的人工调控及其响应环境变化的功能研究

• 批准号: 17J03086
• 负责人: 古川 かほり
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Nagasaki University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2017
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2017-04-26 至 2019-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-17J03086/
• 关键词: 非天然型アミノ酸; 膜透過性ペプチド; ドラックデリバリーシステム; ペプチド; 構造制御

本年度は、これまで得られた知見を元に、非天然型アミノ酸であるα,α-ジ置換アミノ酸を利用し細胞膜透過性ペプチドの設計・合成ならびにその応用として、siRNAデリバリー機能評価を行った。ペプチドの合成は、Fmoc固相合成法により行い、膜透過性評価のためにペプチドのN末端にはカルボキシフルオレセインを導入した。合成した６種類のペプチドの二次構造解析・膜透過性評価、ペプチド/siRNA複合体の物性評価を行った。CDスペクトルによる二次構造解析の結果、高い細胞膜透過性を有したペプチドが他のペプチドの比較し、α-ヘリックス性が高いことがわかった。遺伝子ノックダウン効果に関しては、ルシフェラーゼを恒常発現しているHuh-7-Luc細胞を用い、ルシフェラーゼに対するsiRNA 、スクランブル配列のsiRNAを用いて評価を行った。非天然型アミノ酸であるジプロピルグリシンを含有するペプチドのみがノックダウン効果を示し、Lipofectamine 2000と比較して、高いノックダウン効率を示した 。ペプチド/siRNA複合体濃度ペプチド濃度を0.25 uM/10 nMまで下げても高いノックダウン効率が維持されていた。また、ペプチド/siRNA複合体の物性評価により、siRNAと安定な複合体を形成することが高いノックダウン効果に繋がっていることが示唆された。本研究により、siRNAを細胞内に高効率にデリバリーする膜透過性ペプチドに関する有用な知見が得られた。

This year, we have been able to evaluate the function of α,α-substituted siRNA and their use in cell membrane permeability. Fmoc solid phase synthesis, membrane permeability evaluation, N-terminal synthesis, and introduction Secondary structural analysis of six species of siRNAs, membrane permeability evaluation, and physical properties evaluation of siRNAs/siRNAs complexes were performed. The results of secondary structure analysis of CD selection and distribution show that the permeability of high cell membrane is higher than that of low cell membrane. The expression of siRNA in HUH-7-Luc cells was evaluated in vitro. Non-natural type of acid, such as sodium hydroxide, sodium If the concentration of the peptide/siRNA complex is set to 0.25 uM/10 nM, the high efficiency of the peptide can be maintained. Evaluation of the properties of siRNA/siRNA complexes and the formation of siRNA complexes This study found useful insights into the high intracellular efficiency of siRNAs.

项目成果

Peptide foldamers changing their conformations in response to low pH trigger

肽折叠体改变其构象以响应低 pH 触发

• 发表时间: 2017
• 作者: Yamashita;H.;Misawa;M.;Kurihara;M.;Demizu;Y.;大岡伸通，正田卓司，藤里卓磨，柴田識人，服部隆行，栗原正明，出水庸介，内藤幹彦;池田光生，古場百合恵，上田篤志，大庭誠，出水庸介，栗原正明，田中正一;小林寛幸，三澤隆史，大庭誠，田中正一，内藤幹彦，松野研司，出水庸介;三澤隆史，出水庸介;古川かほり，大庭誠，遠山琴美，George Ouma Opiyo，出水庸介，栗原正明，土井光暢，田中正一
• 通讯作者: 古川かほり，大庭誠，遠山琴美，George Ouma Opiyo，出水庸介，栗原正明，土井光暢，田中正一