バキュロウイルスによる宿主行動操作の神経基盤の解明

阐明杆状病毒操纵宿主行为的神经基础

基本信息

  • 批准号:
    18J00134
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 2.33万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for JSPS Fellows
  • 财政年份:
    2018
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2018-04-25 至 2021-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

本研究は、ウイルス感染脳における宿主の発現変動遺伝子(Differentially Expressed Gene: DEG)およびその発現ニューロンの詳細な機能解析を行うことにより、バキュロウイルスが宿主昆虫の脳内の行動中枢を利己的に操作する分子・神経メカニズムを解明することを目標とする。昨年度までに、カイコ培養細胞にCRISPR/Cas13dシステムを導入し、その有効性を実証した。そこで、今年度はCRISPR/Cas13dによるカイコ内在性遺伝子ノックダウン細胞のRNA-seq解析を行ったところ、Cas13d/gRNAの発現により標的遺伝子のmRNAを効率的かつ配列特異的に切断できるが、切断後のRNA断片が少なからず残留することが明らかになった。また、カイコ培養細胞においてCas13d/gRNAを発現させると細胞増殖の減少やhouse-keeping遺伝子の発現低下が見られることが判明した。これらの細胞では一部のトランスポゾンの発現が顕著に上昇していたことから、Cas13d/gRNAがsmall RNA経路に干渉してトランスポゾンの抑制が緩くなったと予想される。したがって、カイコではこうした点を考慮した上でCRISPR/Cas13dを使用する必要があり、今後はこれらの欠点を改善することでツールとしての利便性が上がると考えている。また、今年度はDEGの詳細な機能解析を行うため、ノックイン(TAL-PITCh法)によりDEG発現細胞特異的に外来遺伝子を発現誘導できるGAL4カイコの作出を試みた。しかし、得られたGAL4系統では全くGAL4発現を誘導できなかった。昨年度には中枢神経系特異的遺伝子(nSyb)のGAL4カイコも同様の結果であったことから、カイコにおいては5'UTR領域へのノックインでは標的遺伝子の発現パターンを模倣することが極めて難しい可能性がある。
In this study, infection was detected in the host computer (Differentially Expressed Gene: DEG). The machine was able to analyze the behavior of the host insect in the center of self-interest in the operation center of the host insect. Last year, we learned that we were going to have sex in the past year, and that we had sex in CRISPR/Cas13d. In this year's CRISPR/Cas13d, this year's RNA fragments have been cut off, and the RNA fragments have been cut off. After cutting, the RNA fragments have been cut, and the RNA fragments have been cut off. In the first place, the Cas13d/gRNA cells were detected. The colonization of the cells was not enough. The house-keeping cells were low. This is the first time that you can see that you are in a bad situation. You can see that there is a lot of trouble on the road, Cas13d/gRNA, small RNA, and so on. In the future, we will use the necessary information to improve our convenience. We will use the necessary information in CRISPR/Cas13d. This year's DEG mobile phone will be able to parse the bank data, and use the TAL-PITCh method to detect cell-specific data in the DEG. This will lead to an attempt to detect the GAL4 data. You can use the GAL4 system to realize the full GAL4 system to guide the operation of the system. Last year, the nSyb of the central god system (nSyb) was the same as the results. The results showed that there was a significant increase in the number of patients in the field of 5'UTR.

项目成果

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专著数量(0)
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专利数量(0)
カイコ培養細胞における CRISPR/Cas13d を用いた遺伝子ノックダウンシステムの導入
在培养蚕细胞中引入使用 CRISPR/Cas13d 的基因敲除系统
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    國生龍平;木矢剛智
  • 通讯作者:
    木矢剛智
カイコ培養細胞における新たな遺伝子ノックダウンシステムの導入:CRISPR/Cas13dによる一本鎖RNA切断
在培养蚕细胞中引入新的基因敲除系统:使用 CRISPR/Cas13d 进行单链 RNA 切割
  • DOI:
  • 发表时间:
    2020
  • 期刊:
  • 影响因子:
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  • 作者:
    國生龍平;庄司佳佑;木矢剛智
  • 通讯作者:
    木矢剛智
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