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脊索動物ワカレオタマボヤを用いた母性因子の大規模な機能解析による初期発生の研究

使用脊索动物 Wakareotamaboya 通过母体因素的大规模功能分析研究早期发育

基本信息

批准号：
18J10929
负责人：
松尾正樹
金额：
$ 1.22万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2018
资助国家：
日本
起止时间：
2018-04-25 至 2020-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

未受精卵で局在する母性mRNAは、初期発生において運命決定などの重要な役割を果たす。一方、卵形成過程における母性mRNAの局在メカニズムについては、卵形成中の卵巣のサンプルを時系列に沿って収集することができるモデル生物が限られていたため、未解明の問題が多く残っている。この課題を解決できる特徴を持つ脊索動物ワカレオタマボヤを用いて、卵巣切片のin situ hybridization法の開発を行ったことが、当該年度の主な研究実績である。当研究室においてオタマボヤの卵巣をin situするのは初の試みであったため、まずはそのプロトコルを確立する必要があった。卵巣の発達ステージの判断、固定・パラフィン切片作製の条件や、in situで必要な工程などについて、条件検討を行った。特に、オタマボヤの体組織は小さく白色透明であるため、パラフィン切片を作る際に目視しにくくなる。これを防ぐため、サンプルを着色アガーによって固める手法を独自に確立した。その結果、既知の局在しない母性mRNAについて、卵巣で染色することに成功した。これにより卵形成過程におけるmRNAの局在メカニズムを調べることがより現実的になった。以上の実験は、本研究計画を引き継ぐ予定である留学生研究生に指導しながら行った。また、前年度に発見していた未受精卵で植物極付近に局在する母性mRNAが、受精後にどのような局在パターンをとるのかをwhole mount in situ hybridization法によって調べた。その結果、第一極体放出、第二極体放出までは、未受精卵の時と同じように植物極側に局在するが、2細胞期になると植物半球後方へ移動することが明らかになった。

The maternal mRNA of unfertilized eggs is important for determining the fate of eggs during early development. In the process of egg formation, maternal mRNA is distributed in a time-series, and the biological limit is not solved. This problem was solved by the study of the characteristics of chordates, the development of in-situ hybridization method for egg slices, and the results of the main research in this year. When the research room is open, it is necessary to open the door. Determination, fixation, slicing, necessary engineering, condition evaluation Special, white and transparent tissue, cut into sections, visually The method of coloring is established independently. The results, known in the context of maternal mRNA detection, egg staining and success This is the process of egg formation. mRNA is present in the egg. The above research plan is based on the guidance of international students and graduate students. The unfertilized eggs are found in the previous year, and the plant is very close to the maternal mRNA, and the whole mount in situ hybridization method is used to modulate the expression of the unfertilized eggs. The result is that the first polar body is released, the second polar body is released, and the unfertilized egg is released at the same time.