ヒトＴＮＲＣ６ＡとＣＮＯＴ１による核内転写制御機構の解明と細胞癌化との関連

阐明人TNRC6A和CNOT1的核转录控制机制及其与细胞癌变的关系

• 批准号: 18J13860
• 负责人: 須澤 壮崇
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for JSPS Fellows
• 财政年份: 2018
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2018-04-25 至 2020-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-18J13860/
• 关键词: microRNA; GW182; リン酸化; RNAサイレンシング

TNRC6Aは、miRNAによる遺伝子抑制機構において、miRNA-AGO複合体とCCR4-NOT複合体を結ぶ足場タンパク質として機能する。近年、TNRC6Aが核-細胞質間シャトリングタンパク質であり、miRNAを核内へ輸送することが明らかとなったが、核内における機能については不明な点が多い。本研究では、TNRC6Aの核内機能の解明を試みた。・TNRC6A複合体構成因子の解析：質量分析法を用いたTNRC6A複合体構成因子の解析により、CCR4-NOT複合体の一部が核内でもTNRC6Aと相互作用することが明らかとなった。CCR4-NOT複合体は核内において、c-Myc等のプロモーター領域に結合し転写調節に働くことが報告されているが、TNRC6Aをノックダウンすることによるこれらの遺伝子発現への影響は見られなかった。そのため、核内CCR4-NOT複合体による既知の転写調節とは異なる機構により、遺伝子発現を制御する可能性が示唆された。また、KEGGを用いた解析から、核内TNRC6Aの相互作用因子としてスプライソソーム関連因子も多く検出されたことから、TNRC6Aは核内で複数の異なる遺伝子制御機構に関与する可能性が示唆された。・TNRC6Aのリン酸化による機能制御：質量分析によりTNRC6Aのリン酸化残基が検出された。AGOやCCR4-NOTとの相互作用領域におけるリン酸化残基を同定し、相互作用に与える影響を検証した。その結果、AGOとの相互作用はリン酸化により安定化し、CCR4-NOTとの相互作用は減弱する傾向が見られた。さらに、AGOとの相互作用領域のリン酸化はRNAサイレンシング活性の増強に働くことが分かった。TNRC6Aは核内および細胞質で異なるリン酸化パターンを有することから、リン酸化がTNRC6Aの細胞質と核内における相互作用形成および機能を制御する可能性が示唆された。

TNRC6A is responsible for miRNA-AGO complex, CCR4-NOT complex, miRNA-AGO gene suppressor mechanism, miRNA-AGO complex, CCR4-NOT complex, miRNA-AGO gene suppressor mechanism, miRNA-AGO complex, CCR4-NOT complex, miRNA-AGO complex, CCR4-AGO complex In recent years, TNRC6A has been involved in nuclear and cytoplasmic interactions, and miRNA has been involved in nuclear transport. This study aims to clarify the nuclear function of TNRC6A.·Analysis of TNRC6A complex components: Mass spectrometry analysis of TNRC6A complex components, CCR4-NOT complex part of the nuclear TNRC6A interaction CCR4-NOT complex has been reported to be involved in the regulation of nuclear, c-Myc, and c-Myc domains. TNRC6A has been reported to be involved in the regulation of nuclear, c-Myc, and c-Myc domains. The CCR4-NOT complex in the nucleus is known to regulate and control the mechanism of gene expression. The interaction factors of TNRC6A in the nucleus and the correlation factors of TNRC6A in the nucleus are analyzed by KEGG. Functional control of TNRC6A protein: identification of TNRC6A protein residues by mass spectrometry AGO CCR4-NOT interaction domain identification, interaction domain and influence As a result, AGO interaction tends to stabilize and CCR4-NOT interaction tends to weaken. The interaction domain of AGO and RNA is very active. TNRC6A has the potential to regulate the formation and function of cytoplasmic and cytoplasmic interactions between TNRC6A and TNRC6A.

项目成果

Identification and functional analysis of phosphorylated amino acids in the C-terminal region of a human GW182 family protein, TNRC6A.

人 GW182 家族蛋白 TNRC6A C 端区域磷酸化氨基酸的鉴定和功能分析。

• 发表时间: 2018
• 作者: 宗像扶早子;須澤壮崇;西賢二;程久美子
• 通讯作者: 程久美子

Establishment of human GW182 family knock out cells using CRISPER/Cas9 system and analysis of their effects on RNA silencing.

利用CRISPER/Cas9系统建立人GW182家族敲除细胞并分析其对RNA沉默的影响。

• 发表时间: 2019
• 作者: Efe Begar;Masataka Suzawa;Kumiko Ui-Tei
• 通讯作者: Kumiko Ui-Tei

Phosphorylation of GW-II motif of a human GW182 family protein, TNRC6A, enhances AGO binding and RNA silencing activity.

人类 GW182 家族蛋白 TNRC6A 的 GW-II 基序的磷酸化可增强 AGO 结合和 RNA 沉默活性。

• 发表时间: 2019
• 作者: Masataka Suzawa;Valeriia Volodkina;Kenji Nishi and Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Kenji Nishi and Kumiko Ui-Tei.

Subcellular localization-dependent phosphorylation of human TNRC6A differently regulates AGO binding and RNA silencing activities.

人 TNRC6A 的亚细胞定位依赖性磷酸化以不同方式调节 AGO 结合和 RNA 沉默活性。

• 发表时间: 2019
• 作者: Masataka Suzawa;Valeriia Volodkina;Kenji Nishi;Hiroko Kozuka-Hata;Masaaki Oyama and Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Masaaki Oyama and Kumiko Ui-Tei.

Analysis of RNA silencing activity of human GW182 family knockout cells generated by CRISPR-Cas9.

CRISPR-Cas9 产生的人 GW182 家族敲除细胞的 RNA 沉默活性分析。

• 发表时间: 2019
• 作者: Efe Begar;Masataka Suzawa;Kumiko Ui-Tei.
• 通讯作者: Kumiko Ui-Tei.