Neuron-specific persistent cytomegalovirus infection in the developing cerebrum

点击翻译按钮获取中文摘要

21年度までの実績：MCMV-e1-proにおいて転写開始点からnt -172までがMCMV-IE3結合によるe1-pro活性化に必須とされている．しかし，nt -1000までにIE3結合モチーフが35個存在していることから，これらの結合モチーフがIE3結合によるe1-pro活性化にどの程度関与するかについて検討を行った．転写開始点から，nt -943, nt -839, nt -556, nt -449, nt -193までのe1-pro領域を欠損したe1-proレポータープラスミド，p-e1proΔ943-EGFP, p-e1proΔ839-EGFP, p-e1proΔ556-EGFP, p-e1proΔ449-EGFP, p-e1proΔ193-EGFPを作成した．22年度実績：上記のプラスミドをpcDNA-MCMV-ie3と共にHEK293T細胞に導入し，EGFP発現を比較した．その結果，p-e1proΔ943-EGFP, p-e1proΔ839-EGFP導入細胞では，EGFP発現は極僅かであった．しかし，p-e1proΔ556-EGFP導入細胞で急激な発現増を認め，p-e1proΔ449-EGFP, p-e1proΔ193-EGFPでは暫時発現が増強していった．従って，nt -839までの上流域に存在するIE3結合モチーフもe1-pro活性化に関与し得ることが明らかとなった．このことからnt -449からnt -1373に存在する神経細胞特異的エンハンサーの作用にIE3の結合が関わると推測された．また，核移行シグナルの付いたAcGFP1を組み込んだMCMV作製を試みた．具体的にはpLtRt(NheI-)-e1pro1.4-EGFPをNheI/EcoRV Diggestionして，PCR増幅したAcGFP1-NucをNheI/EcoRV siteに組み込んで，pLtRt(NheI-)-e1pro1.4-AcGFP1-Nucを作製した．このトランスファープラスミドから相同組み換え用カセットを切り出し，相同組み換えによって，rMCMV-1373-nucとrMCMV-448-nucを作製することができた．