リボソーム融合型ナノポア技術による1分子タンパク質網羅定量解析

利用核糖体融合纳米孔技术对单分子蛋白质进行全面定量分析

基本信息

  • 批准号:
    21K18232
  • 负责人:
  • 金额:
    $ 16.64万
  • 依托单位:
  • 依托单位国家:
    日本
  • 项目类别:
    Grant-in-Aid for Challenging Research (Pioneering)
  • 财政年份:
    2021
  • 资助国家:
    日本
  • 起止时间:
    2021-07-09 至 2024-03-31
  • 项目状态:
    已结题

项目摘要

当該年度においては、ペプチドの1分子ナノポア計測実現を目指し、平面膜上での脂質膜再構成とSecYEGチャネルタンパク質の挿入、及びSecAタンパク質との複合体に対する基質ペプチドの膜通過シグナルの検出を試みた。4つのチャネルを同時計測可能なナニオンテクノロジーズ社のOrbit miniと温度コントローラーを導入し、温度条件を変えながら脂質膜の構築を試した。脂質膜は多重膜にならず、脂質二重膜の単重膜が形成される条件を決めることができた。さらに、SecYEGが膜に挿入されることを印加電圧を可変にした電流応答の変化で複数回確認できたが、導入効率は低いままであったため、ペプチド通過計測には至らなかった。次年度においては、これらを改善するために、PURE systemを用いた無細胞合成系によるSecYEG挿入や脂質膜の組み合わせの改良、さらには平面膜のみならず、液滴接触法を用いて実験系の改良を試みる。これによってペプチドの通過信号を得ることができたら、複数種類のペプチドの通過データをいくつかの印加電圧で取得し、それらに対して機械学習による解析を行う。その後、複数種類のペプチドを分類することを通過電流データのみで行うことを目標とする。さらには、リボソーム分子とSecYEGとの融合を試み、合成過程と新生ペプチドの通過過程の同時測定を試みる。このために、シグナル配列の検討、温度条件検討、及びイオン強度条件検討が必須となる。
When the annual に お い て は, ペ プ チ ド の 1 molecular ナ ノ ポ ア measuring be presently を refers し, plane membrane で の lipid membrane reconstitution と SecYEG チ ャ ネ ル タ ン パ ク qualitative の scions into and び SecA タ ン パ ク qualitative と の complex に す seaborne る matrix ペ プ チ ド の membrane through シ グ ナ ル の 検 try out を み た. 4 つ の チ ャ ネ ル を may at the same time measuring な ナ ニ オ ン テ ク ノ ロ ジ ー ズ club の Orbit mini と temperature コ ン ト ロ ー ラ ー を import し を, temperature conditions - え な が ら lipid membrane の build を try し た. The formation される conditions of lipid membranes にならず multilayer membranes にならず and lipid dilayer membranes 単 heavy membranes が depend on を, める, とがで and た. さ ら に, SecYEG が membrane に scions into さ れ る こ と を Inca electric 圧 を can - に し た current 応 の answer - the で plural back to confirm で き た が, import, low rate of unseen は い ま ま で あ っ た た め, ペ プ チ ド through measuring に は to ら な か っ た. Annual に お い て は, こ れ ら を improve す る た め に, PURE system を い た cell free GeChengXi に よ る SecYEG scions into や lipid membrane の group み close わ せ の improvement, さ ら に は plane membrane の み な ら を ず, droplet contact method with い て be modified を 験 is の try み る. こ れ に よ っ て ペ プ チ ド の based on signal を る こ と が で き た ら, plural kinds の ペ プ チ ド の through デ ー タ を い く つ か の Inca electric 圧 で obtain し, そ れ ら に し seaborne て rote learning に よ る parsing う を line. After そ の, plural kinds の ペ プ チ ド を classification す る こ と を by current デ ー タ の み で line う こ と を target と す る. さ ら に は, リ ボ ソ ー ム molecular と SecYEG と を try み の fusion, synthetic process と freshman ペ プ チ ド の through process の simultaneous determination を try み る. The <s:1> ために, シグナ シグナ configuration of <s:1> 検, temperature conditions 検, and び <s:1> and <s:1> <s:1> intensity conditions 検 must が.

项目成果

期刊论文数量(0)
专著数量(0)
科研奖励数量(0)
会议论文数量(0)
专利数量(0)
レーザー照射による固液界面でのリポソームの捕捉と破壊
激光照射在固液界面捕获和破坏脂质体
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    内田匠;山崎洋人;上村想太郎
  • 通讯作者:
    上村想太郎
Photothermally enhanced single molecule nanopore sensing
光热增强单分子纳米孔传感
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hirohito Yamazaki;Sotaro Uemura
  • 通讯作者:
    Sotaro Uemura
フォトサーマル効果を活用した一分子ナノポア計測技術の創出
利用光热效应创建单分子纳米孔测量技术
  • DOI:
  • 发表时间:
    2021
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hisano Masumi;Chen Han Y. H.;山崎洋人 ,上村想太郎
  • 通讯作者:
    山崎洋人 ,上村想太郎
ナノポア計測によるCALHM2チャネルダイナミクスの解明
通过纳米孔测量阐明 CALHM2 通道动力学
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    中村宗太郎;山崎洋人;志甫谷渉;濡木理;上村想太郎
  • 通讯作者:
    上村想太郎
A study on the structural dynamics of the nucleosome containing H2A.B using solid-state nanopores
利用固态纳米孔研究含有H2A.B的核小体的结构动力学
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    Hikaru Nozawa;Hirohito Yamazaki;Ryo Iizuka;Rina Hirano;Tomoya Kujirai;Hitoshi Kurumizaka;Sotaro Uemura
  • 通讯作者:
    Sotaro Uemura
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N-terminal residues of Drosophila Argonaute2 possess the ability to form amyloid fibrils
果蝇Argonaute2的N端残基具有形成淀粉样原纤维的能力
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
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  • 通讯作者:
    上村 想太郎
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  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    成田 晴香; 桑原 誠;小森 智貴; 村上 僚;島 知弘;塩見 美喜子;上村 想太郎;潮田 亮
  • 通讯作者:
    潮田 亮
N- terminal region of Drosophila Argonaute2 can form amyloid fibrils
果蝇Argonaute2的N端区域可以形成淀粉样原纤维
  • DOI:
  • 发表时间:
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  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    成田 晴香; 桑原 誠;小森 智貴; 村上 僚;島 知弘;塩見 美喜子;上村 想太郎
  • 通讯作者:
    上村 想太郎
ショウジョウバエアルゴノート 2 の N 末端領域はアミロイド様凝集体を形成する(N-terminal region of Drosophila Argonaute2 can form amyloid-like aggregates)
果蝇Argonaute2的N端区域可以形成淀粉样蛋白样聚集体
  • DOI:
  • 发表时间:
    2022
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    成田 晴香;島 知弘;飯塚 怜;塩見 美喜子;上村 想太郎
  • 通讯作者:
    上村 想太郎
電極アレイを用いた高速液滴分取
使用电极阵列高速液滴分离
  • DOI:
  • 发表时间:
    2019
  • 期刊:
  • 影响因子:
    0
  • 作者:
    磯崎 瑛宏;中川 悠太;Mun Hong Loo;芝田 悠大;田中 直樹;Dwi Larasati Setyaningrum;Jee-Woong Park;白崎 善隆;三上 秀治;上村 想太郎;Dino Di Carlo;合田圭介
  • 通讯作者:
    合田圭介

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    2023
  • 资助金额:
    $ 16.64万
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    10652895
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    $ 16.64万
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    $ 16.64万
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