Development of micropropagation technology by inducing totipotent cells derived from vegetative tissues of adult Sugi and Hinoki trees

通过诱导来自成年杉树和扁柏树营养组织的全能细胞开发微繁殖技术

• 批准号: 21K19154
• 负责人: 丸山 毅
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Forest Research and Management Organization
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19154/
• 关键词: 万能細胞; 不定胚; 苗条原基; 栄養繁殖; マイクロプロパゲーション; スギ; ヒノキ; 組織培養

令和４年度の研究実績は、以下のとおり。①スギ・ヒノキ成木の栄養器官から得られた無菌化の外植体を用いて、不定胚形成細胞や苗条原基などを誘導するための培養条件を探索した。その結果、誘導用培地にサイトカイニン（6-ベンジルアミノプリン、ゼアチン、メタトポリン）を主に添加する場合は、マルチシュート或いは苗条原基の誘導に対し、オーキシン（2,4-ジクロロフェノキシン酢酸、1-ナフチル酢酸、3-インドール酢酸）を主に添加する場合は、カルス或いは不定胚形成細胞の誘導が観察された。②スギ・ヒノキ成木の栄養器官から得られた無菌化のシュートを用いて、外植体の低温処理法やThin Cell Layer 培養法の効果を検証した。複数クローンのシュートを輪切りにし（薄さ0.5-1.0 mm）、オーキシンやサイトカイニン等を含む不定胚形成細胞誘導用培地に置床し、５℃（1-12週間）の低温処理を行った。その結果、ほぼすべての実験ではカルス形成が見られたものの、不定胚形成細胞の誘導がごくまれにしか観察されなかった。この結果は、培養条件又は外植体に施された処理のいずれかが適切ではなかったことを示唆された。引続き次年度は、不定胚形成細胞の誘導率を向上させるための培養条件を再検討する。

2022财政年度的研究结果如下。 1）使用从雪松和柏树树的营养器官获得的无菌外植体，我们寻找培养条件，以诱导无定形的胚胎形成细胞和射击原始细胞。结果，当生长素（2,4-二氯苯二氧酸乙酸，1-二氯苯基乙酸，1-二甲基二乙酸，3--吲哚酸）主要添加到诱导中时，主要将细胞分裂素（6-苯二唑啉，Zeatine，metatoporine）添加到诱导培养基中时，主要添加到诱导中。 2）使用从雪松和柏树树的营养器官获得的无菌芽，我们验证了Epplants低温治疗和薄细胞层培养方法的影响。将多个克隆芽切成圆形（薄0.5-1.0 mm），放置在培养基中，以诱导无定形胚胎，含有生长素，细胞分裂素等的细胞，并在5°C（1-12周）进行低温处理。结果，在几乎所有实验中都观察到愈伤组织形成，但是仅观察到无定形胚胎形成细胞的诱导。该结果表明，培养条件或应用于外植体的治疗是不合适的。在明年继续，将重新检查明年的培养条件以提高非晶胚胎发生细胞的诱导率。