時期および組織特異的なプロテインノックダウンを可能とするデグロンシステムの開発

开发能够实现时间和组织特异性蛋白质敲低的降解决定子系统

• 批准号: 21K19188
• 负责人: 成瀬 智恵
• 金额: $ 4.08万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19188/
• 关键词: デグロン; マウス; プロテインノックダウン

生体でのプロテインノックダウンは，2022年に我々のグループを含めたマウス生体への実装例３例が初めて報告され，現在も世界的に改良が進められており，将来的に広く使用される技術になると考えられる。しかしながら，現在のところ，特異性や効率に改良の余地がある。そこで，これらの問題点を克服する方法の開発を進めており，現在，サリドマイドアナログを用いた簡便なプロテインノックダウン法の開発を目指している。サリドマイドアナログは，タンパク質分解に関わるE3ユビキチンリガーゼの構成要素の１つであるCRBNへ結合し，本来基質とならない「ネオリガンド」の分解を誘導し，様々な薬理作用を示す。これまで，サリドマイド誘導体に反応するデグロンタグをEGFPに融合させた遺伝子発現ベクター，および，Creにより反転すると初めて機能的になるタグを組み込んだ遺伝子発現ベクターを細胞に導入して，タグの反転効率およびタンパク質ノックダウンの効果を評価してきた。デグロンタグをC末に組み込むと効率の良いノックダウンが可能となることが明らかになった。また，Creを作用させることによって，タグの反転は高効率で行われ，ノックダウンが起こることが明らかになった。これまでヒト細胞，または，CRBNをヒト化したマウス細胞を用いて実験を行ってきたが，マウス細胞においても機能するタグを開発したため，今後は，野生型マウスで機能するサリドマイドアナログを用いたノックダウン系を用いて研究を進める予定である。

Born body で の プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン は, 2022 に I 々 の グ ル ー プ を containing め た マ ウ ス raw body へ の be early loading cases in 3 が め て report さ れ, now も world に improved が into め ら れ て お り, future に hiroo く use さ れ る technology に な る と exam え ら れ る. <s:1> ながら ながら, now ながら と ろ ろ ろ, specific や efficiency に improvement <s:1> room for がある. そ こ で, こ れ ら の problem を overcome す る method の open 発 を into め て お り, now, サ リ ド マ イ ド ア ナ ロ グ を with い た simple な プ ロ テ イ ン ノ ッ ク ダ ウ ン method の open 発 を refers し て い る. サ リ ド マ イ ド ア ナ ロ グ は, タ ン パ ク qualitative decomposition に masato わ る E3 ユ ビ キ チ ン リ ガ ー ゼ の elements の 1 つ で あ る CRBN へ し, original matrix と な ら な い "ネ オ リ ガ ン ド" を induced し の decomposition, others 々 な 薬 conditioning を す. こ れ ま で, サ リ ド マ イ ド inductor に anti 応 す る デ グ ロ ン タ グ を EGFP fusion に さ せ た posthumous son 伝 発 now ベ ク タ ー, お よ び, Cre に よ り inverse planning す る と early め て functionary に な る タ グ を group み 込 ん だ posthumous son 伝 発 now ベ ク タ ー を cells に import し て, タ グ の inverse planning working rate お よ び タ ン パ ク qualitative ノ ッ ク ダ ウ ン の unseen fruit を review 価 し て き た. デ グ ロ ン タ グ を に group at the end of the C み 込 む と good working rate の い ノ ッ ク ダ ウ ン が may と な る こ と が Ming ら か に な っ た. ま た, Cre を role さ せ る こ と に よ っ て, タ グ の inverse planning は line high working rate で わ れ, ノ ッ ク ダ ウ ン が up こ る こ と が Ming ら か に な っ た. こ れ ま で ヒ ト cells, ま た は, CRBN を ヒ ト change し た マ ウ ス cells を using い て be 験 を line っ て き た が, マ ウ ス cells に お い て も function す る タ グ を open 発 し た た め, henceforth は, wild type マ ウ ス function of で す る サ リ ド マ イ ド ア ナ ロ グ を with い た ノ ッ ク ダ ウ を ン department with い を て research into め る designated で あ る.

项目成果

A degron system targeting endogenous PD-1 inhibits the growth of tumor cells in mice.

• DOI: 10.1093/narcan/zcac019
• 发表时间: 2022-06
• 期刊: NAR cancer
• 影响因子: 5.1

The SMASh degron system targeting endogenous PD-1 inhibits the growth of MC-38 tumor cells in mice.

SMASh degron 系统靶向内源性 PD-1，抑制小鼠体内 MC-38 肿瘤细胞的生长。

• 发表时间: 2022
• 作者: Kamiya Genta;Kitada Nobuo;Saito-Moriya Ryohei;Obata Rika;Iwano Satoshi;Miyawaki Atsushi;Hirano Takashi;Maki Shojiro;岩野 智;岩野 智;堀江恭二;成瀬智恵，杉原一司，パンシュチ，宮崎龍彦，杉山文博，浅野雅秀;成瀬智恵，杉原一司，パンシュチ，宮崎龍彦，杉山文博，浅野雅秀
• 通讯作者: 成瀬智恵，杉原一司，パンシュチ，宮崎龍彦，杉山文博，浅野雅秀

内在性PD-1へのデグロンタグ組込みによるマウス生体におけるがん細胞増殖の抑制

通过将降解决定子标签整合到内源性 PD-1 中抑制活体小鼠的癌细胞增殖

• 发表时间: 2022
• 作者: Kamiya Genta;Kitada Nobuo;Saito-Moriya Ryohei;Obata Rika;Iwano Satoshi;Miyawaki Atsushi;Hirano Takashi;Maki Shojiro;岩野 智;岩野 智;堀江恭二;成瀬智恵，杉原一司，パンシュチ，宮崎龍彦，杉山文博，浅野雅秀
• 通讯作者: 成瀬智恵，杉原一司，パンシュチ，宮崎龍彦，杉山文博，浅野雅秀

必要な時だけ標的タンパク質を壊すがん治療―薬剤投与によるマウス内在性PD-1の分解―

仅在必要时破坏靶蛋白的癌症治疗 - 通过给药降解小鼠内源性 PD-1 -