非アルコール性脂肪性肝疾患の治療に資するホスホリパーゼCの解明

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LPIAT1を欠損したHuh-7細胞は、LPIAT1欠損マウス肝臓と同様にアラキドン酸含有PI の減少とオレイン酸含有PI の増加、中性脂質の蓄積がみられる。この細胞に[14C]グリセロールを添加し、[14C]ラベルされたPI の分解を経時的に調べると、LPIAT1 KO 細胞では野生型に比べてPI の分解が顕著に亢進した。このLPIAT1欠損によるPI分解の亢進はマウス肝臓においてもみられ、分解産物の追跡から、PLC様の酵素が働いていることが示唆されている。本年度は細胞レベルでのPI 分解アッセイを利用して、各種阻害剤を添加し、PI分解を抑制する化合物をスクリーニングした。その結果、PLCの一般的な阻害剤であるU73122やリソソームの酸性化を抑制するクロロキンではLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制できなかった。一方で、脂質のホスファターゼを抑制する阻害剤の1つがLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進を抑制することを見出した。またLPIAT1 KO 細胞におけるPI分解の亢進において、分解されるPIに分子種特異性があるか調べるために、d8グリセロールラベルによる標識PIのLC-MSでの検出系を検討した。d8グリセロールの添加条件、LC条件、MRM条件を決定し、48時間のd8グリセロールラベルで10-15%のPIをラベルし、それらの逆相カラムを用いたLC-MS/MSにより個々に検出・定量することに成功した。