独自のポアデバイスを用いて超微小細菌の実体と動態を捉える

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2022年度は、昨年度に引き続き、ポアデバイス試験に供する超微小細菌株の増殖特性、細胞サイズ等を特徴付けた。本研究では、生存様式の異なる3タイプの超微小細菌の検出に挑戦する計画である：タイプA：培地・培養条件に依らず細胞が常に小さい細菌、タイプB：培養条件に応じて細胞が矮小化する細菌、タイプC：形態変化を伴う多型性の細菌（微小細胞を含みうる）。昨年度、タイプAおよびBに属する菌株（Aurantimicrobium属菌等）の基盤的データを収集したため、本年度はタイプCに関するデータの取得を試みた。具体的には、コロニー形成単位計数や蛍光顕微鏡観察・電子顕微鏡観察を用いて、Oligoflexus属細菌やSilvanigrella属近縁株の形態変化とその大まかな細胞サイズを調べた。その結果として、微小な細胞が出現することに加えて、LIVE/DEAD assay kitによる細胞生存率の評価によってそれら細胞が生細胞である可能性が高いことを確認した。また一部の超微小細菌株については、粒子トラッキング法とコールター原理法による測定も実施し、電子顕微鏡による観察等で算出した細胞体積と整合的な結果が得られた。以上のように、本年度もポアデバイス検出に供する菌株の試料調製に必要なデータを収集する等の成果を得た。一方で、新型コロナウイルス感染症に伴う対応により、ポアデバイスによる実測試験の実施が困難となり、研究期間を延長するに至ったが、分担者らとともに、今後優先して測定する菌株、また実験の条件（ポア径等）に関する議論をオンライン会議等で重ねて、次年度の実測で使用するデバイスと関連する試薬・消耗品類を絞り込んだ。