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Construction of high-throughput drug discovery screening system using bile duct organoids and fluid devices

利用胆管类器官和流体装置构建高通量药物发现筛选系统

基本信息

批准号：
21K19490
负责人：
紙谷聡英
金额：
$ 3.91万
依托单位：
Tokai University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
财政年份：
2021
资助国家：
日本
起止时间：
2021-07-09 至 2024-03-31
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究では、肝疾患のメカニズム解析・創薬スクリーニングに向けて、ヒトiPS細胞から肝臓組織への分化誘導系を駆使した次の研究項目を推進する。１．自己凝集能を用いたヒトiPS細胞由来肝組織の形成法の確立２．多発肝のう胞症を模倣する疾患ヒトiPS細胞由来肝組織系の構築３．PDMS流体デバイスを用いた、ハイスループット評価システムの作製１に関しては、ヒトiPS細胞から持続増殖可能な肝前駆細胞を誘導し、凍結保存や長期増殖、また必要に応じて成熟肝細胞へ分化誘導が可能な細胞を単離した。この細胞を用いることで、平面や細胞外マトリクス包埋培養によって肝の組織化が可能な条件を検討している。２に関しては、共同研究者が行っている多発肝のう胞のヒト疾患患者のゲノムシークエンス結果から、新規の多発肝のう胞発症に関わる制御因子の候補を探索している。これらの因子を解析する系として、アデノ随伴ウイルス（AAV)を用いてin vitroでヒトiPS細胞由来肝前駆細胞・肝細胞でゲノム編集を誘導する系を構築した。AAVにCas9タンパク質と対象となる遺伝子に対するgRNAを導入することで、効率的なin-del変異が誘導可能である。さらにCsa9を発現するプロモーターを工夫することで、細胞特異的なゲノム編集が可能となる。３に関しては、１，２の結果をもとにデバイスの作成などを進めており、肝臓の自己凝集を効率的に行うデバイスなどを解析中である。

This study is intended to advance the research project on the differentiation induction system of iPS cells from liver tissue to liver disease. 1. 2. Establishment of iPS cell-derived liver tissue system by using PDMS fluid to evaluate the function of iPS cell-derived liver tissue system 1. Establishment of iPS cell-derived liver tissue system by using PDMS fluid to evaluate the function of iPS cell-derived liver tissue system 2. Establishment of iPS cell-derived liver tissue system by using PDMS fluid to evaluate the function of iPS cell-derived liver tissue system 3. It is necessary to induce differentiation of mature hepatocytes and to isolate them. The conditions for liver tissue formation in vitro culture were discussed. 2. To explore candidates for regulatory factors in patients with multiple hepatic cellular diseases, co-investigators conducted research on the results of new regulations on multiple hepatic cellular diseases. The analysis of these factors is based on the construction of a system for the induction of apoptosis in iPS cells derived from hepatocytes and hepatocytes. AAV Cas9 is the most important gene in the genome. Csa9 is a cell specific protein that can be produced in a cell. 3, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 10, 11, 10,