Investigation of the mechanism of nucleic acid metabolism to establish a a new therapeutic strategy.

研究核酸代谢机制以建立新的治疗策略。

• 批准号: 21K19566
• 负责人: 北村 幸子
• 金额: $ 4.16万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Challenging Research (Exploratory)
• 财政年份: 2021
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2021-07-09 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21K19566/
• 关键词: 核酸代謝; ピリミジン塩基; 核酸合成阻害; 葉酸受容体; 5FU; 卵巣癌; ピリミジン合成阻害

RNA, DNA合成の直接的な要素となる、デオキシリボースが付加した核酸（dNTP）を、qPCRを応用した手法で定量化する方法の確立に、引き続き今年度取り組んだ。昨年度に引き続いて、米国やハンガリーで同様の測定を行っている研究グループと、何度もweb会合を開いて再現性のある手法の確立に努めた。その結果、次第に精度が上昇しつつあるが、精密な定量が毎回可能、という状況には至っていない。機器の更新も行ったが、それだけでは十分でないことが判明した。具体的には、試薬や機器など細かな要因の積み重ねにより、厳密な定量が困難となることが判明した。しかしながら、厳密ではないものの、半定量とすることは多くの場面で可能となってきたため、化学療法を行った際の核酸（dNTP）の動態についてプレリミナリーに検討をおこなった。その結果、細胞障害性薬剤の添加により、dCTP, dTTPが増加する可能性が示唆された。これまで同様の動態は、乳癌細胞株で確認されているだけで、卵巣癌細胞での試みは初めてであり、興味深い結果であると考えている。加えて、核酸の原料である葉酸受容体が、卵巣がんでは高く発現していることが報告され、我々のサンプルでも確認できた。葉酸受容体の阻害により、卵巣癌細胞の増殖が低下することを示唆するデータも得ることができた。葉酸受容体の拮抗で、より幅広い核酸合成の低下が期待され、その解明を計画している。

今年，我们继续致力于建立一种使用使用QPCR的方法，来量化与RNA和DNA合成直接相关的脱氧核糖核酸添加的核酸（DNTP）。去年之后，我们与研究小组举行了许多网络会议，这些研究小组在美国进行了类似的测量，并努力建立可重复的方法。结果，准确性逐渐提高，但尚未达到每次都有可能进行精确量化的情况。我们还更新了设备，但事实证明这还不够。具体而言，已经发现，由于试剂和设备等小因素的积累，严格的量化变得困难。但是，尽管并不严格，但在许多情况下，已经有可能实现半定量定量，因此我们在化学疗法期间就核酸（DNTPS）的动力学进行了初步研究。结果，建议添加细胞毒性剂可以增加DCTP和DTTP。这是卵巢癌细胞的第一次尝试，我们认为这是一个有趣的结果，因为在乳腺癌细胞系中仅证实了类似的动态。此外，据报道，叶酸受体是一种核酸的原料，在卵巢癌中高度表达，我们能够在样品中证实。还可以证明，抑制叶酸受体会减少卵巢癌细胞的增殖。叶酸受体的拮抗作用有望导致核酸合成的更大降低，我们计划澄清这一点。