ジアシルグリセロールキナーゼが関与するがん進行機構の探索

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ジアシルグリセロールキナーゼζ(DGKZ)と腫瘍の悪性度に関連したDGKZの新たな生理機能を探索するために、DGKZの様々なアイソフォームのクローニングを試みた。まずGENBANKに登録されている主要な５つアイソフォームを選び、qPCR用プライマーを製作した。大腸がん細胞株(HCT116、RKO、DLD1、SW480、SW620、Colo320、Caco2)および正常大腸上皮細胞のRNAを使用して、大腸がんで強く発現しているDGKZアイソフォームをqPCRにより解析した。その結果、特に強く発現している２つのアイソフォームを同定した(NM_001105540.1およびNM_001199266.1)。この２アイソフォームのクローニングを行ったところ、思いの外手間がかかったものの最近ようやく完了した。これからアイソフォームの発現による細胞のフェノタイプの違いについて検討を進めていく。メラノーマにおけるジアシルグリセロールキナーゼγ(DGKG)の生理機能探索についても引き続き検討を続けた。DGKGの不活性型ミュータント(KD, kinase-dead)と常時活性化型ミュータント(CA, constitutively active)のどちらを発現してもメラノーマ細胞の遊走能および浸潤能が強く抑制されることから、酵素活性とは無関係な未知のメカニズムの存在が示唆されている。そこでDGKGと結合する新規タンパク質を同定するために細胞抽出物から免疫沈降によってDGKGを単離し、質量分析法を用いて候補タンパク質の絞り込みを行う。現在は予備実験を重ねている段階である。