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ジアシルグリセロールキナーゼが関与するがん進行機構の探索

探索涉及二酰甘油激酶的癌症进展机制

基本信息

批准号：
22K05444
负责人：
甲斐正広
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Sapporo Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05444/
关键词：
ジアシルグリセロールキナーゼ大腸がんメラノーマ

项目摘要

ジアシルグリセロールキナーゼζ(DGKZ)と腫瘍の悪性度に関連したDGKZの新たな生理機能を探索するために、DGKZの様々なアイソフォームのクローニングを試みた。まずGENBANKに登録されている主要な５つアイソフォームを選び、qPCR用プライマーを製作した。大腸がん細胞株(HCT116、RKO、DLD1、SW480、SW620、Colo320、Caco2)および正常大腸上皮細胞のRNAを使用して、大腸がんで強く発現しているDGKZアイソフォームをqPCRにより解析した。その結果、特に強く発現している２つのアイソフォームを同定した(NM_001105540.1およびNM_001199266.1)。この２アイソフォームのクローニングを行ったところ、思いの外手間がかかったものの最近ようやく完了した。これからアイソフォームの発現による細胞のフェノタイプの違いについて検討を進めていく。メラノーマにおけるジアシルグリセロールキナーゼγ(DGKG)の生理機能探索についても引き続き検討を続けた。DGKGの不活性型ミュータント(KD, kinase-dead)と常時活性化型ミュータント(CA, constitutively active)のどちらを発現してもメラノーマ細胞の遊走能および浸潤能が強く抑制されることから、酵素活性とは無関係な未知のメカニズムの存在が示唆されている。そこでDGKGと結合する新規タンパク質を同定するために細胞抽出物から免疫沈降によってDGKGを単離し、質量分析法を用いて候補タンパク質の絞り込みを行う。現在は予備実験を重ねている段階である。

DGKZ is a new type of biological agent. GENBANK is registered in the main 5 categories, qPCR is used in the production. Colorectal cell lines (HCT116, RKO, DLD1, SW480, SW620, Colo320, Caco2) were analyzed by qPCR using RNA from normal colorectal epithelial cells. The result of the test is that the test results are very strong and the test results are very stable (NM_001105540.1 and NM_001199266.1) The two sides of the border are facing each other, and the two sides are facing each other. This is the first time that a person has been involved in a crime. The physiological function of DGKG is explored in the study of the physiological function of DGKG. DGKG's inactive form (KD, kinase-dead) and its constantly active form (CA, constitutively active) are both present in the cell cycle. The cell migration energy and infiltration energy are strongly inhibited. The enzyme activity is not related to the existence of unknown forms. Therefore, DGKG and the new binding agent can be determined equally, so that DGKG can be separated from cell extracts and used for immunosedimentation, and quality analysis can be used as a candidate for the new binding agent. Now I'm ready for you.