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異なる生活史段階を考慮した固着性動物の環境DNAによる検出・定量手法の確立

考虑不同生命史阶段的固着动物环境DNA检测和定量方法的建立

基本信息

批准号：
22K05787
负责人：
広瀬雅人
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Kitasato University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2026-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K05787/
关键词：
コケムシ環境DNA 生活史休眠期海面養殖固着性動物休眠 eDNA

项目摘要

本研究では，コケムシ類を中心とした固着性動物を対象とした水槽実験と実海域調査により，それらの分布や生活史と環境DNAによる検出量との関係を明らかとし，より簡便な調査手法の確立につなげることで，多様な環境における固着性動物の現存量推定を可能にすることを目指す．本年度は，岩手県沿岸域において試験板と養殖ホタテに付着したコケムシ2種を対象に種特異的なプライマーとプローブを作成し，採水・採泥試料からの環境DNAによる検出の有無や実際の付着量との関係を調べた．その結果，付着量が多い時期には検出率も上がったが，付着量が少ない時期や採水地点が付着地点から100 m以上離れた場合には結果が安定しなかった．採泥試料からは付着量が減少した後に検出されたことから，脱落した死骸による検出の可能性が示唆された．休眠期に着目した実験においては，オオマリコケムシの休芽を入れた休芽水，およびそれらの休芽が発芽した後の初虫水を分析した結果，休芽水においても初虫水同様に本種が検出された．この結果から，休眠期であっても環境DNAによる検出が可能であることが明らかとなった．また，コモチカエデコケムシを用いた同様の実験においても，休眠期である芽体の状態で本種が検出された．本種については沖縄県名護市においてSCUBAによる採水と採泥も実施した結果，休眠期の8月には採水試料から本種は検出されなかったが，群体出現期の11月には本種が検出された．一方，採泥試料からは11月においても本種は検出されなかった．これは，本種の分布がパッチ状であるためと考えられる．さらに本年度は，浄水器のプレフィルターを改良したフィルターケースを水中ポンプと真空ポンプの間に接続した採水装置を用いて，環境DNAを効率良く採取・検出する方法を検討した結果，大量の環境水を現場で直接フィルターに濾過でき，その後の解析も正常に実施できることが確認された．

This study aims to clarify the relationship between the distribution, life history, environmental DNA, and quantity of sessile animals in marine surveys, and to establish a simple survey method that makes it possible to estimate the standing stock of sessile animals in diverse environments. This year, the relationship between the amount of water collected and the amount of soil collected was adjusted. The result is that the amount paid is more than one time, the rate of water extraction is higher than one time, the amount paid is less than one time, and the water extraction location is more than 100 m away. The possibility of detection of the sample after the decrease in the amount of the sample is indicated. During the dormancy period, the germination rate of the plant was reduced to 0. 5%, and the germination rate was reduced to 0. 5%. The result of this is that the dormant period is the period when the environmental DNA is released. This species is detected during dormancy. This species was discovered in August during the dormancy period and in November during the colony emergence period. A party, mining mud sample from November to November, this species from November to October.これは，本种の分布がパッチ状であるためと考えられる. This year, the water purifier is improved, the water purifier is connected to the vacuum collector, and the environmental DNA efficiency is good. The method of detection is discussed. The result is that a large amount of environmental water is directly filtered and analyzed.