Development of a contact hypersensitivity model using Th2-induced humanized mice

使用 Th2 诱导的人源化小鼠开发接触超敏反应模型

• 批准号: 22K06060
• 负责人: 大野 裕介
• 金额: $ 2.75万
• 依托单位: Central Institute for Experimental Animals
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06060/
• 关键词: Th2細胞; ヒト化マウス; 接触性皮膚炎; IL-4; アレルギー

我々が確立したNOG-hIL-4 Tgは全身にhIL-4が発現し、移植したヒトPBMC由来CD4+T細胞のTh2細胞への分化が期待できる。これまでにCMVプロモーターおよびCAGプロモーター支配下にhIL-4を遺伝子挿入した2系統のNOG-hIL-4 Tgが樹立されているが、両系統におけるTh2細胞誘導性能の差については未解析であった。そこで令和4年度はまず両系統におけるTh2細胞誘導性の比較解析を行い、どちらの系統がよりTh2誘導型ヒト化マウスとして至適であるか評価を行った。脾臓CD4+T細胞のmRNA発現を次世代シークエンサーで網羅的に解析したところ、CAG-hIL-4 Tgの方がGATA3やTh2細胞関連遺伝子の発現が高い傾向にあった。またFACS解析により、CAG-hIL-4 Tgはより高頻度でhIL-4産生CD4+T細胞を誘導することが分かった。以上より、CAG-hIL-4 Tgでより高いTh2誘導性が示されたため、次にハプテン塗布による接触性皮膚炎の誘導を行った。ヒトPBMC移植後4週にオキサゾロン(OXA)溶液を後背部に塗布し感作させ、その後計7回のOXA暴露により接触性皮膚炎を誘導した。皮膚切片の免疫組織化学染色(IHC)を行ったところ、CAG-hIL-4 Tgでのみ顕著な皮膚へのT細胞集積が観察され、従来型NOGマウスでは観察されなかった。また上記の結果はOXAを耳介塗布した実験系においても再現された。抗IL-4Ra抗体（デュピルマブ）を投与したところ、皮膚へのT細胞集積は抑制され、CAG-hIL-4 Tgを使用した接触性皮膚炎モデルはTh2細胞依存的な病態を示し、薬剤評価モデルとして本系統が有用であることを見出した。

We have established that NOG-hIL-4 Tg is expected to induce hIL-4 expression throughout the body and to differentiate PBMC from CD4 +T cells and Th2 cells after transplantation. The hIL-4 gene was introduced into the NOG-hIL-4 Tg of Th2 cells under the control of CMV and CAG. A comparative analysis of Th2 cell inductivity in different systems was conducted. The expression of CD4 +T cell mRNA in the next generation was analyzed in the same way as CAG-hIL-4 Tg, and the expression of GATA3/Th2 cell-associated mRNA tended to increase. CAG-hIL-4 Tg was detected by FACS analysis and hIL-4 was induced to CD4 +T cells with high frequency. CAG-hIL-4 Tg is high in Th2 induction and low in Th 2 induction. Contact dermatitis was induced by applying OXA solution to the back 4 weeks after PBMC transplantation and by OXA exposure 7 weeks later. Immunohistochemical staining (IHC) of skin sections was performed, the T cell accumulation at the bottom of the skin under CAG-hIL-4 Tg was observed, and the type of NOG was observed. The result is OXA. Anti-IL-4Ra antibody (anti-IL-4Ra antibody) is used to inhibit T cell accumulation in skin, CAG-hIL-4Tg is used to inhibit T cell accumulation in 2-cell-dependent diseases, and the system is useful.