Analysis of the molecular mechanism of reduction of protein secretion in peptide:N-glycanase deficient cells

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細胞質ペプチド:N-グリカーゼ(PNGase，哺乳動物ではNGLY1)は糖タンパク質からN-結合型糖鎖を脱離する反応を触媒するアミダーゼであり，真核生物に広く保存されていることが知られている 。新生糖タンパク質は小胞体内腔で正しく折り畳まれた後に，そのタンパク質が機能を発揮する場所へと輸送される。一方，新たに合成された糖タンパク質のうち，正しい折りたたみ構造をとることが出来なかった異常糖タンパク質は小胞体品質管理機構(ERQC)によって選別され，細胞質へと逆行輸送された後に，ユビキチンープロテアソームによって分解される。小胞体関連分解(ERAD)と呼ばれるこの経路の中で細胞質PNGaseはかさ高く表面積のの大きいN-結合型糖鎖をタンパク質から脱離することによって，筒状構造をとっているプロテアソームにおけるタンパク質の分解効率を向上させていると考えられている。我々はNGLY1欠損HeLa細胞(NGLY1-KO細胞)で細胞外への分泌が減少しているタンパク質を複数見出し，その中でwntシグナルの調節に関わるタンパク質DKK1に着目し，解析を進めている。現在までに，DKK1の発現減少は遺伝子転写レベルではみられないことを確認している。このことから，本タンパク質は翻訳後，なんらかの理由で細胞外への分泌が減少していることが予想された。そこで我々は，FLAGタグを付加したDKK1をHeLa細胞に発現させてその細胞外への分泌異常のメカニズムを詳細に解析することとした。その結果，分泌異常だけでなく，細胞外へと分泌されたFLAG-DKK1はNGLY1-KO細胞由来の野生株のものと比べると，若干の分子量増加が見られた。そこで，この分子量変化に着目しそのメカニズムを明らかにするための解析を実施している。