オルガネラ粒子マルチパラメーター計測で展開する細胞内オルガネラ遷移

通过细胞器颗粒多参数测量开发细胞内细胞器转变

• 批准号: 22K06217
• 负责人: 本田 郁子
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06217/
• 关键词: オルガネラ; 粒子解析; 多変量解析; 1粒子解析; エンドソーム

エンドソームは多様に遷移するオルガネラであり、その詳細分類や遷移過程については多くの報告があるが、未だ統一の見解がない。細胞内に取り込まれた積み荷の、エンドソームを介した多経路への仕分け機構についても、特に哺乳類細胞においては未解決である。その理由は、典型的なオルガネラ研究手法に限界があり、エンドソームの多様なコンパートメントを抽出したり、全貌を定量的に解析したりすることが困難であるからと考えられる。混沌としたエンドソーム分類および多経路の全貌を明らかにする突破口を築くためには、新たなオルガネラ研究手法を導入が求められる。そこで、開発中のオルガネラ粒子マルチパラメーター解析法を応用し、多種のエンドソームマーカーを一度に用いてエンドソーム関連オルガネラ群を定量的に解析することを、本研究の目的としている。今年度は以下に述べるように、主に材料作製や測定条件検討などを行った。１．複数エンドソームマーカーの同時発現細胞を作製した。蛍光タンパク質やHalo-tag, SNAP-tag を融合したエンドソームマーカー RAB5, RAB11, RAB7, CD63の同時安定発現細胞を作製した。２．粒子検出に適したエンドソーム蛍光プローブの検討を行った。リソソームマーカーLAMP1に対する抗体を蛍光ラベルしたものや、エンドサイトーシスの積荷である上皮成長因子、トランスフェリンの蛍光標識試薬（市販）を試験し、エンドソーム関連オルガネラ粒子として検出可能な蛍光プローブを選定した。３．マルチカラー蛍光測定の条件検討を行った。共焦点顕微鏡を用いた蛍光スペクトルイメージングを行い、蛍光色素の種類や励起・検出条件の組み合わせを検討し、蛍光オルガネラ粒子をマルチカラーで同時測定の条件を見出した。

You need to know that you are not in a single situation, and that you have not done so in a single way. In the cell, there is a lot of trouble in the cells, and there is a lot of trouble in the local government organs and special mammalian cells that have not been solved. The reason, the typical research method, the limit, the reason, the reason, the typical research method, the reason, the reason, the The chaotic system is divided into several categories, the full picture of the multi-path, the full picture, the breakthrough, the new research methods and the research methods. In the middle of the study, the analytical method was used, and a number of samples were used in the first place. The quantitative analysis of the population was used in this study. This year, we will describe the following information, and the main materials will be used to determine the conditions. 1. At the same time, the number of copies will not be changed. At the same time, the cell number will be changed. RAB5, RAB11, RAB7, and CD63 are integrated into Halo-tag, RAB11, RAB7, and CD63. The cells are also stable. 2. The particles show that the light is not the same as the light. This is an important step in the detection of LAMP1 antibodies. The results show that there is a positive effect on the growth factor of epithelium, the growth factor of epithelium, the level of light labeling (market), the effect of light on the quality of the particles, and the possibility that they can be selected. 3. To determine the conditions of photometry. The confocal micrometer is used to determine the output conditions such as photoluminescence and photopigmentation. At the same time, the measurement conditions are determined.