相同的組換えでの相同並行三重鎖DNAの働き

同源平行三链DNA在同源重组中的功能

• 批准号: 22K06335
• 负责人: 柴田 武彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06335/
• 关键词: 相同DNA組換え; 組換え中間体; ヘテロ二重鎖DNA; ハイブリッド二重鎖DNA; 相同対合反応; RecA; Rad51; 相同組換え修復; 相同並行三重鎖; ハイブリッド二重鎖; Ｄループ

相同的組換えがDNA二本鎖切断を正確に修復してゲノムを維持する。相同的組換えの要は、切断端からできる単鎖(ss)DNA域が二重鎖(ds)DNAの中から互いに相同な配列を見つけハイブリッドds (Hyb-ds) を作る反応である。この反応の仕組みは未だに定説がない。単分子クライオ電子顕微鏡解析が示唆する、ある酵素がdsDNAの塩基対を開き、できたss域で相手のssDNAとアニールしてHyb-dsを作る「二重鎖開裂が先」モデルと、従来の生化学研究が支持する、ds構造が開く前にssDNAとの相同配列が見つけ出される「二重鎖開裂が後」モデルとがある。本研究の目的は、「二重鎖開裂が後」モデルにだけ想定される「相同並行三重鎖」の存在を示すことで、このモデルの確証を得る。ウイルスとミトコンドリア以外では、生物種に関わらず、ゲノムDNAの相同DNA組換えでは、RecAまたはそのorthologue (別種生物間で、共通の祖先を持ち同じ機能を担う遺伝子、それがコードする蛋白質）であるRAD51、DMC1がHyb-ds形成を行う。その原型であるRecA (蛋白質) は試験管内で高いHyb-ds形成活性を示すので本研究に最適であるが、形成したHyb-dsをＤループにして加工する機能を併せ持つ。そのため、Hyb-dsができた当初、相同並行三重鎖なのかＤループなのか未だに議論が決着しない。Ｄループ安定化と加工の要はRecAやRAD51, DMC1が単鎖DNAと形成するラセン繊維状構造の内側でＤループに接するL2ループ部位にあることが立体分子構造解析の結果から示唆されている。令和４年度は、L2ループの変異蛋白質の大量精製のシステムを確立し、必要な量の野生型RecAとL2ループ変異蛋白質を調製し、変異RecA (蛋白質) の生化学的な性状を明らかにするため、野生型RecAとの比較解析に着手した。

The same system is used to cut off the DNA of ordinary universities and correct the maintenance of the equipment. In the same group of components, the cut-off side has the same configuration in the double (ds) DNA of the DNA domain (ss), and the same column is assigned to ds (Hyb-ds) to reverse the error. The anti-government group has not decided to make a decision. Molecular electron microanalysis and dsDNA microanalysis indicate that the two components of the Hyb-ds system are the same as the one in the ss domain, and that the double split is the first one. The biochemical research is supported, and the ds makes the same configuration before the start of the operation. In this study, the purpose of this study is to determine that the triple operation is the same after the double split, which indicates that the results are successful. In other countries, biological agents, DNA products, the same DNA components, RecA genes, orthologue (other organisms, common ancestors), RAD51, and DMC1 Hyb-ds were used to form a bank. The high Hyb-ds formation activity in the prototype RecA (protein) tube shows that this study is the most important in this study, and the formation of high-level Hyb-ds formation activity is the most important in this study. in this study, the formation of high-level Hyb-ds formation activity in the tube shows that it is the most important in this study. Since the beginning of the year, the same triple operation has been carried out in the same way as in the past. There has been a lot of discussion and discussion. In the process of stabilizing the process, the RecA RAD51 is required, and the results of the analysis of the stereomolecules are shown in the results of the analysis of the stereomolecules in the part of the L2 junction, which is formed by the formation of the DNA. L2, protein, protein, protein.