相同的組換えでの相同並行三重鎖DNAの働き

同源平行三链DNA在同源重组中的功能

• 批准号: 22K06335
• 负责人: 柴田 武彦
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Tokyo Metropolitan Institute of Medical Science
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K06335/
• 关键词: 相同DNA組換え; 組換え中間体; ヘテロ二重鎖DNA; ハイブリッド二重鎖DNA; 相同対合反応; RecA; Rad51; 相同組換え修復; 相同並行三重鎖; ハイブリッド二重鎖; Ｄループ

相同的組換えがDNA二本鎖切断を正確に修復してゲノムを維持する。相同的組換えの要は、切断端からできる単鎖(ss)DNA域が二重鎖(ds)DNAの中から互いに相同な配列を見つけハイブリッドds (Hyb-ds) を作る反応である。この反応の仕組みは未だに定説がない。単分子クライオ電子顕微鏡解析が示唆する、ある酵素がdsDNAの塩基対を開き、できたss域で相手のssDNAとアニールしてHyb-dsを作る「二重鎖開裂が先」モデルと、従来の生化学研究が支持する、ds構造が開く前にssDNAとの相同配列が見つけ出される「二重鎖開裂が後」モデルとがある。本研究の目的は、「二重鎖開裂が後」モデルにだけ想定される「相同並行三重鎖」の存在を示すことで、このモデルの確証を得る。ウイルスとミトコンドリア以外では、生物種に関わらず、ゲノムDNAの相同DNA組換えでは、RecAまたはそのorthologue (別種生物間で、共通の祖先を持ち同じ機能を担う遺伝子、それがコードする蛋白質）であるRAD51、DMC1がHyb-ds形成を行う。その原型であるRecA (蛋白質) は試験管内で高いHyb-ds形成活性を示すので本研究に最適であるが、形成したHyb-dsをＤループにして加工する機能を併せ持つ。そのため、Hyb-dsができた当初、相同並行三重鎖なのかＤループなのか未だに議論が決着しない。Ｄループ安定化と加工の要はRecAやRAD51, DMC1が単鎖DNAと形成するラセン繊維状構造の内側でＤループに接するL2ループ部位にあることが立体分子構造解析の結果から示唆されている。令和４年度は、L2ループの変異蛋白質の大量精製のシステムを確立し、必要な量の野生型RecAとL2ループ変異蛋白質を調製し、変異RecA (蛋白質) の生化学的な性状を明らかにするため、野生型RecAとの比較解析に着手した。

The same DNA sequence is maintained by correct repair of DNA duplex. The same sequence of DNA domains is double locked (ds). The same sequence of DNA domains is double locked (ds). This is the first time I've ever been in a relationship with someone else. Microscopic analysis of single molecule shows that dsDNA bases are open, dsDNA domains are open, ssDNA domains are open, and dsDNA is open. Recent biochemical studies support this. dsDNA structures are open, ssDNA sequences are open, and dsDNA sequences are open. The purpose of this study is to demonstrate and confirm the existence of "identical parallel triple lock" after "double lock cracking". In addition to the above, the biological species are related to the same DNA sequence, and the same DNA sequence of the DNA sequence is related to the same DNA sequence. RecA is an orthologue (a protein that supports all functions common to the ancestors of different species). RAD51 and DMC1 are formed. The prototype RecA (protein) has been shown to have high hybrid-ds formation activity in the test tube. In this study, the optimal function of RecA is to form hybrid-ds and maintain the processing function. The same parallel triple lock is the same as the original triple lock. The main points of D/R stabilization and processing are RecA, RAD51, DMC1, and the formation of DNA. The results of D/R stabilization and processing of D stabilization and processing of D/R stabilization and processing of D/R stabilization. In 2004 and 2005, we established the necessary amount of wild-type RecA and L2 protein for the purification of a large amount of different proteins, and began to analyze the biochemical characteristics of different RecA (protein).