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Direct reprogramming of somatic cells by epithelial-mesenchymal transition

通过上皮间质转化直接重编程体细胞

基本信息

批准号：
22K06808
负责人：
本橋力
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

令和4年度においては、以下の2つの研究を行った。研究1 EMT現象によるゲノムのエピジェネティック状態変化の解析：EMTが起きるとゲノムにエピジェネティック変化が生じ、それにともなって転写の活性が高いクロマチン状態に変化するのではないかと考え、マウス乳腺上皮細胞NMuMGを用いてその検証を行った。NMuMG細胞にEMT関連転写因子（4EMT-TFs）をレトロウィルスにより感染・過剰発現させてEMTを起こし、経日的に細胞をサンプリングし、Histone H3の9番目のLysのTri-Methylationに対する抗体（抗H3K9me3）とHeterochromatin associated proteins 1γ(HP1γ)に対する抗体(抗HP1γ)で免疫染色してクロマチン状態を解析した。一般に転写の活性が高いユークロマチン状態ではH3K9のTri-MethylationとHP1γは減じているといわれているが、EMTの前後でNMuMG細胞の核内の抗H3K9me3陽性率と抗HP1γ陽性率に違いは見られず、両者が減じている証拠は得られなかった。最近では、転写の活性が高いユークロマチン状態でも両者にはあまり変化はないという報告もあるため、違う指標も組み合わせてクロマチン状態の比較解析を行う予定である。研究2 EMT現象を利用したダイレクトリプログラミング法の検討：我々はこれまで神経堤細胞へのダイレクトリプログラミングの研究を通して、EMT現象が細胞にダイレクトリプログラミングされやすい環境を提供している可能性について検討してきた。本年度は、このことを乳腺上皮細胞の心筋細胞へのダイレクトリプログラミングで検証することを計画し、心筋細胞へのダイレクトリプログラミングに必要な転写因子のレトロウィルスベクターの構築と感染条件の検討を行った。

Order and 4 years of research, the following 2 research Study 1 Analysis of EMT phenomenon: EMT starts to develop and develop, and its activity is high in the state of EMT. EMT-related factors (4EMT-TFs) in NMuMG cells are responsible for infection and development of EMT, and antibodies (anti-H3K9me3) and Heterochromatin associated proteins 1γ(HP1 γ) against Lys in Histone H3 cells are analyzed for immunostaining status. In general, the activity of H3K9 and HP1γ in NMuMG cells is high, and the positive rate of anti-H3K9 me3 in nucleus is high. Recently, the activity of writing is high, and the status of writing is high. The activity of writing is high. Study 2: EMT phenomenon is used to investigate the possibility of cell culture and environment protection. This year, we will continue to discuss the development of infection conditions and the development of essential factors for breast epithelial cells and cardiac muscle cells.