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未熟な造血細胞に発現する新規の5回膜貫通型分子M83の機能の解析

未成熟造血细胞中表达的新型五次跨膜分子M83的功能分析

基本信息

批准号：
14770528
负责人：
本橋力
金额：
$ 2.11万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は未熟なヒト血液細胞であるF36P細胞から新規に同定した細胞膜上発現分子であるM83分子の機能を解析するものである。M83分子は既知の分子と全く類似性がない新しい分子であるため、遺伝子ターゲティングマウスを作成して、その機能を調べるのが効果的であると考えた。昨年度においては、M83遺伝子のゲノム構造を明らかにし、細胞膜貫通領域と細胞内領域をコードしている10〜13番目のエクソンを欠損できるようなターゲティングベクターを作製した。本年度においてはこのターゲティングベクターを相同組み換えによりES細胞E14-1に組み入れ、M83遺伝子欠損ES細胞を5クローン作製することができた。また、このES細胞をマウス初期胚に導入して、キメラマウスの作製にも成功した。現在、導入したES細胞がキメラマウス内で生殖系列に分化できるかどうかを確認中であり、確認でき次第、ヘテロとホモのM83遺伝子欠損マウスを作成する予定である。M83の臓器での発現はRT-PCRによって腎臓、肺、肝臓、脾臓、リンパ節、胸腺、骨髄で強く認められる。このことからM83の抗体を作製して免疫組織染色をおこなって実際の臓器での発現を詳細に調べようと考えた。M83の細胞内領域C末端の12アミノ酸からなるペプチドを合成し、これを用いてウサギを免役して、M83細胞内領域に対するポリクローナル抗体の作成に成功した。このポリクローナル抗体を用いて各種の組織切片の免疫染色を現在実行中である。同時にM83に対するモノクローナル抗体の作成にも着手しているが、本年度においてはラットの免疫に用いるM83細胞外領域とのFcキメラタンパク質の精製を試みた。

In this study, we analyzed the function of M83 molecule in immature blood cells. M83 molecules are known to be completely similar to each other. In the past year, the structure of M83 gene was clearly changed, and the cell membrane penetration field and intracellular field were changed from 10 to 13 points. This year, the ES cells E14-1 and M83 were selected for the same group. The ES cells were successfully introduced into the system. Now, introduce ES cells into the reproductive series to differentiate, confirm the order, determine the M83 gene loss, and create a predetermined sequence. M83 gene expression was detected by RT-PCR in kidney, lung, liver, spleen, thymus and bone. The antibody to M83 was prepared and the immunostaining was performed in detail. M83 intracellular domain C-terminal 12-amino-2-methyl-amino-3 - 3-methyl-amino-3-methyl-amino-3 - 3-methyl-amino-4 - 3-methyl-amino-3-methyl-amino-3 - 3-methyl-amino-3-methyl-amino-3 - 3-methyl-amino-3-methyl-amino-3 Immunostaining of various tissue sections is now in progress. At the same time, the production of M83 antibody was started. This year, the purification of M83 extracellular domain and Fc antibody was tried.