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クライオ電子顕微鏡解析による転写メディエーター複合体の転写制御機構の解明

通过冷冻电子显微镜分析阐明转录介体复合物的转录控制机制

基本信息

批准号：
22K06809
负责人：
今崎剛
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

転写メディエーター複合体(以下メディエーター)はRNA polymerase II (Pol II)の転写開始時の制御を行う超分子複合体である. Pol IIに直接結合し転写活性化を行うコアメディエーターと, コアメディエーターに結合し転写の抑制, キナーゼサブユニットによるPol IIのC末端ドメイン(CTD)のリン酸化や, 転写活性化因子のリクルートによる転写活性化を行うCDKモジュール (以下CDKM)から構成されている. つまりCDKMはメディエーターの活性のON/OFFを切り替える最重要因子である. さらにCDKMの変異は精神性疾患, 大腸癌, 肉腫など疾病とも関連している. その重要性にもかかわらずCDKMの分子レベルでの‘転写制御機構は未だ不明である. 本研究では(A) クライオ電子線顕微鏡単粒子解析を用いてCDKMと基質の高分解能構造解析(B) 組換えタンパク質のヒトCDKMとその変異体を用いたリン酸化アッセイによる, 変異のリン酸化への影響の解析を行い, CDKMのリン酸化機構, そしてCDKMに数多くある疾病原因変異とこれら活性との関連を解明する.今年度はクライオ電子顕微鏡単粒子解析に向け安定な基質との複合体調製条件の検討, ならびにグリッド作成条件の検討を行った.

Pol IIにDirect combination of し転ーを行うコアメディエーターと, コアメディエーターに combined with し転のinhibition,キナーゼサブユニットによるPol IIのC-terminal ドメイン (CTD) acidified や,転activation factor のリクルートによる転写activation を行うCDKモジュール (hereinafter CDKM)から constitutes されている. つまりCDKMはメディエーターのActivityのON/OFFをcutり substituteえるThe most important factor is である. さらにCDKMの変differentは Psychiatric disorders, colorectal cancer, Sarcoid disease is related to disease. The importance of CDKM is the molecular structure of CDKM. The control mechanism is unknown. This study is based on (A) single particle analysis using a クライオ electron beam microscope and high-resolution structure analysis using いてCDKM and matrix (B) The combination of えタンパク性のヒトCDKM とその変variant を and いたリン acidified アッセイによる, Analysis of the influence of different acidification and acidification, CDKM acidification mechanism,そしてCDKMに多多くある Disease Cause Changing Differentiation とこれらActivity とのassociated を Explain する.This year We will discuss the modulation conditions of the stable and stable matrix and complex of the single particle analysis using the electron microscopy.ならびにグリッドCreation Conditions の検question を行った.