サルマラリア原虫接着分子とヒト受容体の結合解析

本研究の目的は、二日熱マラリアの重篤化に関与する Plasmodium knowlesi 寄生赤血球の接着機構を解明するため、P. knowlesi 接着分子が結合するヒト血管内皮細胞の受容体を同定し、相互作用を解析することである。まず最初に、すでに同定している P. knowlesi 接着分子の7つのシステインリッチドメイン（C1-C7）のうち、どの部位がヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）に結合するのかを評価するため、細胞外領域の全長及び各ドメインを含む小さな領域について GST タグを付与した組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により作製したところ、想定していたよりも組換えタンパク質の収率がよくなく、またあるドメインで高い結合性が示されたものの新たに作製した組換えタンパク質において再現性が得られなかったため、本方法での結合解析は断念することになった。その代わりに、接着分子のドメインの細胞外領域のうちいくつかのドメインを除いた短い接着分子（C1-C4あるいはC4-C7）を発現する組換え P. knowlesi 原虫を作製し、どのドメインが接着に関与するのかについて HUVEC への結合性を評価することにした。また、HUVEC におけるヒト受容体の同定の際の参考情報とするため、 P. knowlesi 寄生赤血球の接着においてヒト受容体にはタンパク質成分が含まれるのかを確認する目的で、まず培養した HUVEC に対してかなり低濃度のプロテアーゼ処理を行い接着アッセイを試みた。しかし細胞の変形や部分的なプレート上の接着の阻害などが避けられず、ヒト受容体のみをうまく除去することができなかった。

本研究の目的は、二日熱マラリアの重篤化に関与する Plasmodium knowlesi 寄生赤血球の接着機構を解明するため、P. knowlesi 接着分子が結合するヒト血管内皮細胞の受容体を同定し、相互作用を解析することである。まず最初に、すでに同定している P. knowlesi 接着分子の7つのシステインリッチドメイン（C1-C7）のうち、どの部位がヒト臍帯静脈内皮細胞（HUVEC）に結合するのかを評価するため、細胞外領域の全長及び各ドメインを含む小さな領域について GST タグを付与した組換えタンパク質をコムギ胚芽無細胞タンパク質合成系により作製したところ、想定していたよりも組換えタンパク質の収率がよくなく、またあるドメインで高い結合性が示されたものの新たに作製した組換えタンパク質において再現性が得られなかったため、本方法での結合解析は断念することになった。その代わりに、接着分子のドメインの細胞外領域のうちいくつかのドメインを除いた短い接着分子（C1-C4あるいはC4-C7）を発現する組換え P. knowlesi 原虫を作製し、どのドメインが接着に関与するのかについて HUVEC への結合性を評価することにした。また、HUVEC におけるヒト受容体の同定の際の参考情報とするため、 P. knowlesi 寄生赤血球の接着においてヒト受容体にはタンパク質成分が含まれるのかを確認する目的で、まず培養した HUVEC に対してかなり低濃度のプロテアーゼ処理を行い接着アッセイを試みた。しかし細胞の変形や部分的なプレート上の接着の阻害などが避けられず、ヒト受容体のみをうまく除去することができなかった。