αシヌクレイン凝集体の立体構造に基づく新規ワクチン療法の開発

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今年度は、クライオ電子顕微鏡による多系統萎縮症の患者脳に蓄積するαシヌクレイン（aS）凝集体の立体構造を基に新たな変異体を作製し、凝集体形成・シード効果およびワクチンとしての有用性を検討した。部位特異的変異導入法によりaS変異体（K43&45AあるいはK43&45R）を作製し解析を行った。野生型（WT）、K43&45A、K43&45Rモノマーを37度で振とうすると、いずれも経時的に凝集した。これらの凝集体を電子顕微鏡で観察したところ、いずれも線維状の構造が認められた。次にこれらの凝集体のシード活性について検討した。静置したWTモノマー溶液にそれぞれの凝集体を添加したところ、K43&45R凝集体では野生型凝集体よりも強いシード効果が見られたが、K43&45A凝集体ではシード活性が殆ど無いことが判明した。以上より、今回作製した2種類の変異型aSはいずれも37度で振盪すると凝集すること、およびK43&45A変異型凝集体にはシード活性が無いことが明らかとなった。凝集するがシード活性が無いaS変異体の報告はこれまでになく、興味深い結果である。我々はこのK43&45A変異型凝集体の性質に着目し、K43&45A凝集体のワクチンとしての利用を検討した。K43&45A凝集体を野生型マウスに免疫（合計3回）した後、それらの免疫マウス脳にマウスWT凝集体をシードとして接種した。今後、これらのマウス脳の病理学解析を行い、ワクチン接種により凝集体形成が抑制されるか否かについて調べる予定である。また他の変異体を作製し、それらの性質を調べるとともに、最近見いだされたパーキンソン病やレビー小体型認知症患者脳に蓄積するaS凝集体の構造に着目した変異体の作製・性質検討なども行う予定である。