核小体ストレス応答を利用して抗癌剤耐性を解除する新たな小児白血病治療の開発

开发一种新的儿童白血病治疗方法，利用核仁应激反应消除抗癌药物耐药性

• 批准号: 22K07824
• 负责人: 中川 俊輔
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Kagoshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07824/
• 关键词: 小児白血病; 核小体ストレス応答; P53; 免疫染色; 抗腫瘍薬多剤耐性

核小体ストレス応答は，薬剤などのストレスによって核小体からリボソーム蛋白質L11（RPL11）が核内に放出され，MDM2と結合することによって癌抑制因子P53を制御する抗腫瘍システムである。本研究では，1) 診断時の白血病細胞のRPL11発現低下はALLの予後不良因子であるか？，2) RPL11の発現を低下させる機序の解明，3) RPL11の発現を回復させる方法を見出し，小児ALLの多剤耐性を解除すること，の３つを目標としている。2022年度は，主に1)の診断時のRPL11の発現を評価する方法について実験を行った。診断時にRPL11の発現が低い症例は薬剤感受性が悪く，予後不良の可能性が高いと推測できる。これを評価するためにはRPL11発現量を絶対的に比較する技術が必要である。免疫染色は正常細胞と白血病細胞を形態的に区別して蛋白発現を評価できるため，評価方法として適していると考えた。これまでに免疫染色が可能なRPL11抗体は市販されていないが，研究分担者の河原は株式会社医学生物学研究所と共同で免疫染色が可能なRPL11抗体を作製しており，実用化に向けて開発をすすめている。 申請者は，この独自に開発されたRPL11抗体を用いて検討を始めた。まず最初に，ALLの細胞株を用いて，RPL11抗体による免疫染色を行った。様々な条件を検討した結果，核小体に特異的に発現するNucleolinに一致してRPL11が結合する条件を見出した。次に，患者検体を用いてRPL11の免疫染色を行い，細胞株と同様の条件で初発時の患者検体の白血病細胞のRPL11を染色できることが確認できた。今後は免疫染色によるRPL11の定量化を実現させる。免疫染色でRPL11が定量化できたら初発患者の骨髄検体を用いてRPL11の発現量と予後との関連を明らかにする。

Nucleosome protein L11 (RPL11) is released from the nucleus, and MDM2 binds to the tumor suppressor P53 to control tumor resistance. 1) The expression of RPL-11 in leukemia cells at the time of diagnosis was lower than that in ALL cells. 2)RPL11 occurrence and recovery mechanism explained, 3) RPL11 occurrence and recovery method revealed, small ALL multi-agent tolerance released, 3) purpose. In 2022, the method for evaluating the occurrence of RPL11 in the diagnosis of the main part 1) was implemented. The occurrence of RPL11 at the time of diagnosis was low in the case and sensitive to the agent was low in the case, and the possibility of adverse events was high in the case. This is the first time that we've seen RPL11. Immunostaining is used to distinguish between normal cells and leukemic cells. This immunostaining is possible because RPL11 antibody is commercially available, and the research collaborator, Kawahara Institute of Medical Biology, Inc., has jointly developed immunostaining for RPL11 antibody. The applicant has developed the RPL11 antibody independently. Initially, ALL cell lines were immunostained with RPL11 antibody. As a result of this investigation, nucleosomal specificity was detected and RPL11 binding conditions were observed. In addition, immunostaining for RPL11 was performed in patient specimens, and RPL11 was stained in leukemia cells from patient specimens at the time of initial development under the same conditions as cell lines. The quantification of RPL11 in immunostaining will be carried out in the future. Immunostaining for RPL11 quantifies the expression of RPL11 in bone marrow specimens from patients with primary disease and demonstrates the correlation between RPL11 expression and prognosis.