KRAS遺伝子変異導入モデルを用いたゴーハム病発症機序解明と新規治療薬の探索

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KRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスの作製を行う。CAGプロモーター下にLoxP―STOP―LoxP（LSL）を介して KRAS（Q61R）cDNAと、この変異をもつ細胞を追跡できるGFP cDNAを配置した遺伝子断片を生殖細胞に導入したマウスを作製する（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）。これにより、Cre存在下でKRAS Q61R変異を発現するマウスが得られる。KRAS Q61R変異マウス（LSL-KRAS Q61R-GFPマウス）の作製に成功した後、破骨細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、タモキシフェン（TM）依存的に破骨細胞でCreを発現するマウス（Csf1r-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的に破骨細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。同様に、リンパ管内皮細胞に特異的にKRAS Q61R変異を発現させるために、TM依存的にリンパ管内皮細胞でCreを発現するマウス（Prox1-CreERT2マウス）と交配し、TM依存的にリンパ管内皮細胞でKRAS Q61R変異を発現するトランスジェニックマウスを作製する。これらのマウスに、低濃度もしくは高濃度のTMを投与し、出生後に破骨細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスと、出生後にリンパ管内皮細胞に低頻度もしくは高頻度でKRAS Q61R変異を発現させたトランスジェニックマウスを得る。