巨大血小板減少症と破砕赤血球症を伴う未知の先天性造血器疾患の原因解明

阐明与巨血小板减少症和片状红细胞增多症相关的未知先天性造血疾病的病因

• 批准号: 22K07921
• 负责人: 時政 定雄
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Osaka Metropolitan University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K07921/
• 关键词: 巨大血小板; 破砕赤血球; ホスホリパーゼC; プロテインキナーゼC; adducin; F-アクチン; スペクトリン

われわれは先天的に巨大血小板と破砕赤血球を呈する貧血を伴う未知の造血器疾患を見出した。本例は既知の巨大血小板減少症の原因遺伝子に異常を認めず、エクソーム解析にて、phospholipase Cβ3 (PLCβ3) 遺伝子の異常が確認された。一般にphospholipase Cの働きによりPKCが活性化される。PKCには複数のサブタイプが存在し、赤芽球、巨核球にはともにPKCα、PKCδその他が発現していることが報告されている。また、PKC は血小板や赤血球において adducin をリン酸化し、リン酸化された adducin は F-アクチンとスペクトリンの分離を促して膜骨格に影響するという報告がある。本研究ではまず変異型PLCβ3の巨核球に対する影響がPKC阻害薬によってレスキューされるか検証する。次に血小板と赤血球の膜骨格を患者と正常ヒト細胞で比較する。さらに赤芽球、巨核芽球に分化可能な細胞株を用いてPLCβ3の血球分化における働きを調べ、新たな治療法の創出につなげる。まず巨大血小板減少症の原因を解析するため、マウス胎児肝細胞にレトロウイルスベクターを用いて変異型PLCβ3を導入し形質転換を行い、分化巨核球の胞体突起膨隆部数が減少することを確認した。本例のPLCβ3 変異は X-Y ドメインの近傍に位置し、機能が恒常的に活性化されることが推定され、実際、変異型PLCβ3は野生型と比べてPKCをより強く活性化することを示す実験結果を得た。次にPKCαとPKCδのそれぞれの阻害薬を用いて、変異型PLCβ3の巨核球に対する影響を評価したところ、PKCδ阻害薬で胞体突起膨隆部数の減少がレスキューされることを示唆する結果を得た。次にα、δ以外のPKCファミリーの阻害薬を用いて評価することを予定している。また、赤血球と血小板の細胞骨格蛋白を蛍光抗体染色するための準備を行った。

The congenital "giant platelets" broken red blood cells showed "abnormal blood" with unknown hematopoietic disorders. In this case, we know that the cause of giant thrombocytopenia is often confirmed, analyzed, and confirmed by phospholipase C β 3 (PLC β 3). In general, phospholipase C is active and PKC is active. PKC complex number, red bud ball, megakaryon ball, PKC α, PKC δ, and so on. PKC platelets, red blood cells, adducin, acidification, acidification, adducin, F-cells, acid, membrane, bone, bone, In this study, PLC β 3 megakaryoblastoma, PKC blockage, PKC blockage, anti-tumor, anti-tumor, anti-tumor and anti-tumor were studied. The second "platelet" red blood cell "membrane bone" patient "normal" and "cell" were compared. The differentiation of red bud ball and megakaryocytic bud ball may be induced by the differentiation of red bud ball and megakaryocytic bud ball by PLC β 3, blood cell differentiation and new treatment. To analyze the causes of giant thrombocytopenia, to analyze the causes of giant thrombocytopenia. This example shows that PLC β 3 is more potent than wild type PLC β 3. This example shows that the wild type of PLC β 3 is more active than the wild type of PKC, and the results are satisfactory. Sub-PKC α-PKC δ blockage, subtype PLC-β 3 megakaryoblastoma, and PKC delta block cell body protuberance and bulge number. In addition to the secondary alpha and delta, the predetermined data are determined by the use of PKC parameters other than alpha and delta. Red blood cells, platelets, osteoblasts, light antibody staining were used to prepare for the treatment.