膵腺房細胞におけるインスリン作用の意義と新規糖代謝調節機序の解明

阐明胰岛素在胰腺腺泡细胞中作用的意义和新的糖代谢调节机制

基本信息

批准号：
22K08628
负责人：
福田一起
金额：
$ 2.75万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08628/
关键词：
膵腺房細胞膵外分泌細胞糖代謝脂質代謝 NAFLD

项目摘要

令和4年度は膵腺房細胞機能低下が膵β細胞の増殖・過形成、脂肪肝炎をきたすという仮説を検証するため、薬剤誘導性膵炎モデルをC57BL/6Jマウスをもちいて作成した。①Vehicle+通常食群(通常群)、②Cerulein+通常食群(膵炎群)、③Vehicle+ 高脂肪食群(高脂肪食群)④Cerulein + 高脂肪食群（高脂肪食膵炎群）の4群を作成し、8-10週間飼育し、血清膵外分泌酵素やインスリンの測定、耐糖能評価(ipGTT,ipITT)を行った。薬剤誘導膵炎モデルは既報を参考にし使用したが、薬剤投与後8週の段階で薬剤投与前の血清アミラーゼと比べて十分に低下しておらず、他のマウスに比べて血清アミラーゼの低下が認められない個体については薬剤誘導性膵炎が十分に惹起できていないと判断し、解析から除外した。最初のコホートを終え、単離した膵臓、肝臓の病理切片を作成し、免疫染色を行い、膵β細胞の増殖や脂肪肝炎の評価を行っている。すでに開始している第2コホートの評価が終了した後に、解析に十分なサンプル数が確保できる予定である。、また、in vitroにおいてはlipoprotein lipase (LPL)過剰発現ベクターの作成を行った。Adenovirusベクター下にhuman LPLを過剰発現させるベクターを作成し、293細胞へtransfectionを行い、LPLの過剰発現を確認するすることに成功した。作成したAdenovirusベクターをラット由来膵腺房AR42Jにtransfectionし、LPLタンパク質は平均2.5倍以上になることを確認した。現在は、CMVベクターによるLPL過剰発現ベクターを作成しており、LPL過剰発現マウスを作成するために準備を行っている。

在2022年，我们使用C57BL/6J小鼠创建了一种药物诱导的胰腺炎模型，以检验以下假设：胰腺腺泡细胞功能下降会导致胰腺β细胞增殖，增生和steatosis。 Four groups were created: 1) Vehicle+Normal diet group (regular group), 2) Cerulein+Normal diet group (pancreatitis group), 3) Vehicle+High-fat diet group (high-fat diet group) and 4) Cerulein+High-fat diet group (high-fat diet pancreatitis group), and were kept for 8-10 weeks, and serum pancreatic exocrine enzymes and insulin were measured, and glucose tolerance evaluation （IPGTT，IPITT）。基于先前报道的结果，使用了药物诱导的胰腺炎模型，但确定药物诱导的胰腺炎在药物给药后8周的个体与药物给药前的血清淀粉酶相比没有足够降低，并且与其他小鼠相比，血清淀粉酶没有足够的降低，并且没有充分引起，并且被排除在分析中。初始队列后，制备了分离的胰腺和肝脏的病理切片，免疫染色，并评估胰腺β细胞增殖和脂肪变性。在第二个队列的评估开始后，将确保足够数量的样品进行分析。此外，在体外，制备了脂蛋白脂肪酶（LPL）过表达载体。创建了载体以过表达腺病毒载体下的人LPL，并转染到293个细胞中以确认LPL的过表达。将创建的腺病毒载体转移到了老鼠衍生的胰腺AR42J上，并确认LPL蛋白平均2.5倍以上。当前，正在使用CMV矢量创建LPL过表达向量，并正在准备为LPL过表达小鼠的创建。