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ES細胞を用いたヒルシュスプルング病の病態解明および治療戦略構築のための基盤研究

阐明先天性巨结肠的病理学并开发使用 ES 细胞的治疗策略的基础研究

基本信息

批准号：
22K08721
负责人：
藤原なほ
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Juntendo University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

项目摘要

本研究では、新規ES細胞を樹立することで未だ解明されていない腸管神経系の発生メカニズムの解析をもとにH病の病態解明を行い、さらには新しい治療リソースとして革新的な細胞治療方法の臨床応用に展開するための基礎研究を行う。SOX10-VENUSマウスから新規ES細胞を樹立し、これを用いて基礎的なENS発生過程を経時的に観察、腸管神経幹細胞の誘導を行う。さらに、同細胞を用いた移植実験を予定する。同時にSOX10-VENUSマウスから作成した神経塊を用いてH病腸管部位の細胞環境の解析を行うことで、神経発達促進因子を探索し、幹細胞移植後の生着・発達を促進する物質をその後の移植実験でも検証することが可能となる。今年度は、新規ES細胞の作成と腸管神経幹細胞への分化誘導方法確立に取り組んだ。新規に樹立したSV-mES細胞から胚様体を作成し、特定のサイトカイン・増殖因子（bFGF, EGF）を含む無血清培地にて培養開始し、ハンギングドロップ法でEB細胞を作製。3日目からSOX10発現が蛍光顕微鏡下で確認可能となった。これを浮遊培養に移行し、神経細胞塊としてDual Smad Inhibition法で効率的に分化誘導を行う。細胞免疫染色とリアルタイムRT-PCRを用いて分化の判定を行う予定である。

The purpose of this study is to develop a new method for the treatment of H-disease. In this study, the new ES cells have not yet been understood, and the health care system has been analyzed. SOX10-VENUS inspects and guides the operation of the new ES system during the process of setting up and using the basic ENS system. In the same cell and in the same cell, we use the same cell to transplant a predetermined cell. At the same time, the SOX10-VENUS equipment is used to analyze the environment of the cells in the tube parts of the disease, to explore the factors that promote the realization of the disease, and to improve the quality of the cells after the transplantation. This year, the new ES cell management system has established the guidance method of cell differentiation. The new regulation requires SV-mES cell culture to induce embryo formation, specific cell cycle culture factor (bFGF, EGF) to contain serum-free culture start-up, and cell culture method to detect EB cell culture. 3. In the SOX10 view, you can confirm that you may have a problem under the micro light. In this paper, the differentiation and guidance of the rate of migration and Dual Smad Inhibition method are studied. Cellular immunostaining was used to determine the predetermined behavior of RT-PCR by differentiation.

项目成果

期刊论文数量（0）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

IN-VITRO TRANSPLANTATION OF ENTERIC NEURAL CREST CELLS FROM SOX10-VENUS MOUSE EMBRYONIC STEM CELLS IN THE GUT OF THE ENDOTHELIN RECEPTOR B NULL MOUSE MODEL.

内皮素受体 B 空鼠模型肠道中 SOX10-VENUS 小鼠胚胎干细胞的肠神经嵴细胞的体外移植。

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
N Fujiwara;K Miyahara;N Nakazawa-Tanaka;A YamatakaT.
通讯作者：
A YamatakaT.

TRANSPLANTATION OF SOX10-VENUS MOUSE EMBRYONICAGANGLIONIC GUT IN A MOUSE MODELCOMPARATIVE DIFFERENTIATION OF ENTERIC NEURAL CREST-DERIVED CELLS CO-CULTURED WITH GANGLIONIC GUT IN A MOUSE MODEL.

SOX10-Venus 小鼠胚胎神经节肠在小鼠模型中的移植在小鼠模型中与神经节肠共培养的肠神经嵴衍生细胞的比较分化。

DOI：
发表时间：
2022
期刊：
影响因子：
0
作者：
N Fujiwara;K Miyahara;N Nakazawa-Tanaka;A YamatakaT.
通讯作者：
A YamatakaT.

In vitro investigation of the differentiation of enteric neural crest-derived cells following transplantation of aganglionic gut in a mouse model

小鼠模型无神经节肠移植后肠神经嵴衍生细胞分化的体外研究

DOI：
10.1007/s00383-022-05105-2
发表时间：
2022
期刊：
Pediatric Surgery International
影响因子：
1.8
作者：
Fujiwara Naho;Miyahara Katsumi;Nakazawa-Tanaka Nana;Akazawa Chihiro;Yamataka Atsuyuki
通讯作者：
Yamataka Atsuyuki

In vitro共培養モデルを用いたマウス腸管神経幹細胞の発生過程の検証

利用体外共培养模型验证小鼠肠神经干细胞的发育过程