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Novel regenerative therapy for liver failure with skeletal myoblast cell sheet transplantation

骨骼肌成肌细胞片移植治疗肝衰竭的新型再生疗法

基本信息

批准号：
22K08800
负责人：
富丸慶人
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K08800/
关键词：
肝不全筋芽細胞シート再生医療

项目摘要

まず，動物モデルにおける筋芽細胞シート移植の肝再生能の評価を行うべく，C57/BL6Jマウスを用いた非代償性肝硬変および肝切除後の肝不全モデルを作成し，このモデルに精製した筋芽細胞シートを移植し，肝再生能を評価した．筋芽細胞シートの作成は，本学において心不全改善効果を立証し，臨床応用しているものと同様に行った．非代償性肝硬変モデルはチオアセトアミド投与にて作成し，大量肝切除後の肝不全モデルはマウスに肝切除を行うことで作成した．これらのモデルにおいて，筋芽細胞シート移植による肝臓の線維化抑制効果を組織学的検討（H&E染色，Sirius-red染色，Masson Trichrome染色）にて確認した．また筋芽細胞シートを移植したマウスの肝細胞では，細胞増殖のマーカーであるKi67の発現が有意に亢進していた．さらに，筋芽細胞シートを移植したマウスにて，線維化に関連するマーカー（Acta2，Col1α1）の発現レベルが抑制されていることを確認した．また，血液検査では，移植後5週の時点で，筋芽細胞シート群の方がアルブミンが高値であり，AST，ビリルビンが有意に低値であることを確認した．さらに，肝臓の外側葉と中葉を切除する70%肝切除モデルでは筋芽細胞シートを移植したマウスにおいて，切除2日後に残肝重量の有意な増加を認め，さらにKi67陽性細胞率の増加および増殖シグナルの亢進が示された．さらに90%肝切除モデルを用いた検討も行った，このモデルでは，コントロール群では1日を超える生存は認められなかったが，それに対して筋芽細胞シート移植群では約半数で1日以上の生存が確認され、有意な肝切除後の生存期間の延長を認めた．これらの結果は，筋芽細胞シート貼付の肝線維化抑制による肝再生効果能を示唆するものであった．これらの結果を受けて，現在，筋芽細胞シートの効果の作用機序の解明を目指す実験の準備中である．

The evaluation of liver regeneration ability of tendon and germ cell transplantation in animals was carried out. C57/BL6 J cells were used in uncompensated liver cirrhosis and liver insufficiency after hepatectomy. The results of this study show that the development of muscle cells is not complete. Uncompensated cirrhosis is caused by liver failure after massive hepatectomy. Histological examination (H&E staining, Sirius-red staining, Masson Trichrome staining) of the inhibitory effects of liver tissue on the proliferation of tendon and bud cells after transplantation was performed. The development of Ki67 in the proliferation of human liver cells was intentionally stimulated. In addition, it is confirmed that there is a correlation between the development of cell culture and the inhibition of cell culture. Blood test: At 5 weeks after transplantation, the ratio of tendon and bud cell population was high, AST was low, and the ratio of tendon and bud cell population was low. In addition, 70% hepatectomy of the lateral lobe and middle lobe of the liver resulted in an intentional increase in residual liver weight 2 days after hepatectomy, and an increase in Ki67-positive cell rate and proliferation. 90% hepatectomy was performed in the middle of the study, and the survival time of the transplant population was confirmed to be more than 1 day after hepatectomy. The results showed that the inhibition of liver regeneration by tendon cell adhesion was not effective. The results of this study were analyzed and the mechanism of action of tendon and bud cells was clarified.