Elucidation of perineural invasion of distal cholangiocarcinoma using tissue clearing method

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本研究では、「遠位胆管癌の神経周囲浸潤病巣における浸潤能の獲得やその形態的変化は、癌としての悪性度に関わる変化と結びついている」という仮説から、遠位胆管癌のうち予後良好である症例群と予後不良となる症例群において、その浸潤形態やメカニズムが異なることを証明することが研究目標である。遠位胆管癌の悪性度獲得にかかわる因子の検討として、本研究では(ア) 遠位胆管癌の神経周囲浸潤の定量化、(イ) 遠位胆管癌の神経栄養因子の発現強度の定量化、(ウ) 組織透明化法による遠位胆管癌の癌浸潤部の観察の3つの観点からアプローチする計画である。上記のうち2022年度は主に(ア) 遠位胆管癌の神経周囲浸潤の定量化および(ウ) 組織透明化法による遠位胆管癌の癌浸潤部の観察の2点に重点をおいた。(ア)遠位胆管癌の神経周囲浸潤の定量化では2010-2015年にかけて当施設で手術治療を実施した遠位胆管癌の症例をを対象として病理組織標本を再評価し、(1)神経周囲浸潤の個数の集計、(2)胆管壁内外での神経周囲浸潤の集計、(3)神経周囲浸潤の形態別集計(Grade1: 神経の一部に浸潤、Grade2: 神経の全周性に浸潤、Grade3: 神経束内部まで浸潤)を行う。これら3形式の集計結果から統計学的に予後不良となる浸潤形態を解析した。(ウ) 組織透明化法による遠位胆管癌の癌浸潤部の観察では、2020-2022年にかけて当施設で手術治療を実施した遠位胆管癌の症例を対象とし、病理標本から癌組織を採取し、組織透明化法を施行し得られた標本の観察を行った。胆管癌組織をCK19、神経軸索をTuj-1、神経周囲の存在するschwann細胞をS-100タンパクを用いた蛍光免疫染色を行い共焦点顕微鏡で観察を行う。観察データは画像ソフトImarisを用いた解析を実施し、癌組織の浸潤過程や胆管壁内外の神経体積の測定を行った。