頭頸部扁平上皮癌の神経周囲浸潤：ゲノム編集を用いた腫瘍生物学的解析

头颈鳞状细胞癌的神经周围浸润：使用基因组编辑进行肿瘤生物学分析

基本信息

批准号：
22K09934
负责人：
倉田俊一
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09934/
关键词：
頭頸部扁平上皮癌 p63 浸潤神経神経周囲浸潤 TP63

项目摘要

令和４年度(2022年度)は頭頸部扁平上皮癌由来細胞株からゲノム編集によって作ったp63ノックアウト細胞に関して、遺伝子発現の解析を行うとともに、マトリゲルフィルターによる神経周囲浸潤(PNI)のアッセイ系の構築に向けて実験を進めた。成果を以下に要約する。(1) ゲノム編集細胞としてはすでに中咽頭扁平上皮癌由来FaDu細胞株からCRISPR-Cas9法で構築したTP63遺伝子のノックアウト細胞株で、TP63発現全体が停止することが確認されたので、本研究でPNI活性を親細胞と比較する実験に用いることとした。(2) 遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行ったところ、ノックアウト細胞は上皮間葉転換（EMT）を示す明確な変化を示した。加えて NEFL, NCAM1、NRCAM、NEUROD2、SEMA3D/4G/5Bほか神経発生と関連する遺伝子発現の大幅な上昇が検出された。その一部についてRT-qPCRとウエスタンブロットで確認を進めた。(3) 神経周辺浸潤（PNI）活性のアッセイ系を構築するために、まず一般的な浸潤アッセイとしてMatrigelチャンバーを用いて、血清を誘因剤として下層に移動する細胞を測定した。浸潤効率はノックアウト細胞で親細胞の2倍に上昇していた。癌組織は不均一な細胞集団であるが、TP63発現が低下してEMTを示す細胞は集団的な浸潤を先導することが最近報告され、その観察と一致している。さらに誘因細胞としてシュワン細胞に由来する細胞株を用いる浸潤アッセイの条件を検討した。

在2022年，我们分析了由基因组编辑从头和颈部鳞状细胞癌衍生的细胞系中创建的p63基因组细胞上的基因表达，并进行了实验，以建立使用Matrigel滤镜的测定系统进行周期性侵袭（PNI）。结果总结下面。（1）作为基因组编辑的细胞，已经证实，由CRISPR-CAS9方法构成的TP63基因的基因敲除细胞系来自源自口咽细胞鳞状细胞癌的FADU细胞系，并且TP63的全部表达均表达TP63，因此在这项研究中，在这项研究中使用IT来将其用于与Parenti pardi pardi pardie parenti parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent parent。（2）基因表达的微阵列分析表明，敲除细胞的明显变化，表明上皮 - 间质转变（EMT）。此外，检测到了基因表达的显着增加，例如NEFL，NCAM1，NRCAM，Neurod2，SemA3D/4G/5B以及其他相关的神经发生。其中一些已使用RT-QPCR和Western印迹证实。（3）首先使用Matrigel腔室作为一般入侵测定法测量了使用血清作为诱导剂迁移到卧式的细胞进行神经周围入侵（PNI）活性的测定系统。在敲除细胞中，侵袭效率的提高是父母细胞的两倍。尽管癌组织是异质细胞群体，但最近据报道，表现出具有TP63表达降低的EMT的细胞导致集体侵袭，这与该观察结果一致。此外，研究了使用源自雪旺细胞作为诱导细胞的细胞系的侵袭测定条件。