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頭頸部扁平上皮癌の神経周囲浸潤：ゲノム編集を用いた腫瘍生物学的解析

头颈鳞状细胞癌的神经周围浸润：使用基因组编辑进行肿瘤生物学分析

基本信息

批准号：
22K09934
负责人：
倉田俊一
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09934/
关键词：
頭頸部扁平上皮癌 p63 浸潤神経神経周囲浸潤 TP63

项目摘要

令和４年度(2022年度)は頭頸部扁平上皮癌由来細胞株からゲノム編集によって作ったp63ノックアウト細胞に関して、遺伝子発現の解析を行うとともに、マトリゲルフィルターによる神経周囲浸潤(PNI)のアッセイ系の構築に向けて実験を進めた。成果を以下に要約する。(1) ゲノム編集細胞としてはすでに中咽頭扁平上皮癌由来FaDu細胞株からCRISPR-Cas9法で構築したTP63遺伝子のノックアウト細胞株で、TP63発現全体が停止することが確認されたので、本研究でPNI活性を親細胞と比較する実験に用いることとした。(2) 遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行ったところ、ノックアウト細胞は上皮間葉転換（EMT）を示す明確な変化を示した。加えて NEFL, NCAM1、NRCAM、NEUROD2、SEMA3D/4G/5Bほか神経発生と関連する遺伝子発現の大幅な上昇が検出された。その一部についてRT-qPCRとウエスタンブロットで確認を進めた。(3) 神経周辺浸潤（PNI）活性のアッセイ系を構築するために、まず一般的な浸潤アッセイとしてMatrigelチャンバーを用いて、血清を誘因剤として下層に移動する細胞を測定した。浸潤効率はノックアウト細胞で親細胞の2倍に上昇していた。癌組織は不均一な細胞集団であるが、TP63発現が低下してEMTを示す細胞は集団的な浸潤を先導することが最近報告され、その観察と一致している。さらに誘因細胞としてシュワン細胞に由来する細胞株を用いる浸潤アッセイの条件を検討した。

Ling and 4 years (2022) the origin of flat epithelial carcinoma of the mother cell line (2022). The cell line was divided into two parts: the cell line, the cell line, the cell The results are as follows. The main results are as follows: (1) FaDu cell line, CRISPR-Cas9 method, TP63 cell line, cell line, PNI activity, cell line, cell (2) there is a clear indication that the cell epithelium (EMT) is clearly displayed. Add NEFL, NCAM1, NRCAM, NEUROD2, and SEMA3D/4G/5B to give birth to a large number of people. Please make sure that you are in a better position to make sure that you are in a better position. You will not be able to RT-qPCR this movie. (3) the activity of PNI was determined by Elisa, the general method was used to determine the concentration of Matrigel, and the serum was moved to determine the concentration of DNA by Elisa. The immersion rate is 2 times higher than that of the cell. Cancer tissue heterogeneity and low EMT were detected in the cancer tissue, indicating that the cell collection of the cancer tissue was recently reported, and the results were consistent with each other. The results showed that the cancer tissue was not uniform, and the low EMT was detected in the cancer tissue. Because of the origin of the cell, the cell line was immersed in the cell and the condition was not affected.