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頭頸部扁平上皮癌の神経周囲浸潤：ゲノム編集を用いた腫瘍生物学的解析

头颈鳞状细胞癌的神经周围浸润：使用基因组编辑进行肿瘤生物学分析

基本信息

批准号：
22K09934
负责人：
倉田俊一
金额：
$ 2.58万
依托单位：
Kanagawa Dental College
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09934/
关键词：
頭頸部扁平上皮癌 p63 浸潤神経神経周囲浸潤 TP63

项目摘要

令和４年度(2022年度)は頭頸部扁平上皮癌由来細胞株からゲノム編集によって作ったp63ノックアウト細胞に関して、遺伝子発現の解析を行うとともに、マトリゲルフィルターによる神経周囲浸潤(PNI)のアッセイ系の構築に向けて実験を進めた。成果を以下に要約する。(1) ゲノム編集細胞としてはすでに中咽頭扁平上皮癌由来FaDu細胞株からCRISPR-Cas9法で構築したTP63遺伝子のノックアウト細胞株で、TP63発現全体が停止することが確認されたので、本研究でPNI活性を親細胞と比較する実験に用いることとした。(2) 遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行ったところ、ノックアウト細胞は上皮間葉転換（EMT）を示す明確な変化を示した。加えて NEFL, NCAM1、NRCAM、NEUROD2、SEMA3D/4G/5Bほか神経発生と関連する遺伝子発現の大幅な上昇が検出された。その一部についてRT-qPCRとウエスタンブロットで確認を進めた。(3) 神経周辺浸潤（PNI）活性のアッセイ系を構築するために、まず一般的な浸潤アッセイとしてMatrigelチャンバーを用いて、血清を誘因剤として下層に移動する細胞を測定した。浸潤効率はノックアウト細胞で親細胞の2倍に上昇していた。癌組織は不均一な細胞集団であるが、TP63発現が低下してEMTを示す細胞は集団的な浸潤を先導することが最近報告され、その観察と一致している。さらに誘因細胞としてシュワン細胞に由来する細胞株を用いる浸潤アッセイの条件を検討した。

In 2022, the organization of cell lines derived from squamous cell carcinoma of the head and neck was further developed. The results are as follows: (1)TP63 gene was constructed by CRISPR-Cas9 method from FaDu cell line, and TP63 gene expression was completely stopped. The PNI activity in this study was compared with that in parent cells. (2)The expression of the gene is expressed in epithelial mesenchymal transition (EMT). Add NEFL, NCAM1, NRCAM, NEUROD2, SEMA3D/4G/5B to the list, and there will be a significant increase in the number of related events. A part of RT-qPCR is used to confirm the progress. (3)The activity of PNI was determined by the following methods: construction of PNI system, general PNI system, application of PNI system, serum system and migration of PNI cells. The infiltration rate of the parent cells was increased by 2 times. Cancer tissue is heterogeneous in cell aggregation, TP63 expression is low, EMT is indicative of cell aggregation, and infiltration is a precursor to recent reports and observations. The conditions for cell infiltration are discussed.