頭頸部扁平上皮癌の神経周囲浸潤：ゲノム編集を用いた腫瘍生物学的解析

头颈鳞状细胞癌的神经周围浸润：使用基因组编辑进行肿瘤生物学分析

• 批准号: 22K09934
• 负责人: 倉田 俊一
• 金额: $ 2.58万
• 依托单位: Kanagawa Dental College
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09934/
• 关键词: 頭頸部扁平上皮癌; p63; 浸潤; 神経; 神経周囲浸潤; TP63

令和４年度(2022年度)は頭頸部扁平上皮癌由来細胞株からゲノム編集によって作ったp63ノックアウト細胞に関して、遺伝子発現の解析を行うとともに、マトリゲルフィルターによる神経周囲浸潤(PNI)のアッセイ系の構築に向けて実験を進めた。成果を以下に要約する。(1) ゲノム編集細胞としてはすでに中咽頭扁平上皮癌由来FaDu細胞株からCRISPR-Cas9法で構築したTP63遺伝子のノックアウト細胞株で、TP63発現全体が停止することが確認されたので、本研究でPNI活性を親細胞と比較する実験に用いることとした。(2) 遺伝子発現のマイクロアレイ解析を行ったところ、ノックアウト細胞は上皮間葉転換（EMT）を示す明確な変化を示した。加えて NEFL, NCAM1、NRCAM、NEUROD2、SEMA3D/4G/5Bほか神経発生と関連する遺伝子発現の大幅な上昇が検出された。その一部についてRT-qPCRとウエスタンブロットで確認を進めた。(3) 神経周辺浸潤（PNI）活性のアッセイ系を構築するために、まず一般的な浸潤アッセイとしてMatrigelチャンバーを用いて、血清を誘因剤として下層に移動する細胞を測定した。浸潤効率はノックアウト細胞で親細胞の2倍に上昇していた。癌組織は不均一な細胞集団であるが、TP63発現が低下してEMTを示す細胞は集団的な浸潤を先導することが最近報告され、その観察と一致している。さらに誘因細胞としてシュワン細胞に由来する細胞株を用いる浸潤アッセイの条件を検討した。

Make and 4 year (year 2022) origin は head and neck squamous cell carcinoma cell lines か ら ゲ ノ compiling に ム よ っ て as っ た about ノ ッ ク ア ウ ト cells に masato し て, but 伝 発 line is の analytic を う と と も に, マ ト リ ゲ ル フ ィ ル タ ー に よ る god 経 weeks 囲 invasion (PNI) の ア ッ セ イ is の build に to け て be 験 を into め た. Result を the following に offer する. (1) Compiling cells ゲ ノ ム と し て は す で に in those origin FaDu squamous cell carcinoma cell lines か ら CRISPR で Cas9 method to construct し た TP63 heritage 伝 son の ノ ッ ク ア ウ ト cell lines で, TP63 発 now all が stop す る こ と が confirm さ れ た の で, this study で PNI を pro active cells と compare す る be 験 に with い る こ と と Youdaoplaceholder0 た. (2) heritage 伝 son 発 is の マ イ ク ロ ア レ イ parsing line を っ た と こ ろ, ノ ッ ク ア ウ ト epithelial mesenchymal cells は planning in (EMT) を す indicated explicitly な variations change を shown し た. The addition of えて NEFL, NCAM1, NRCAM, NEUROD2, SEMA3D/4G/5Bほ Shintoki development と related する derivative 伝 development な a significant な increase が検 an された increase された Youdaoplaceholder0 そ て て て てRT-qPCRとウエスタ ブロットで ブロットで confirm を in めた. (3) god 経 weeks 辺 invasion (PNI) active の ア ッ セ イ department を build す る た め に, ま ず general な infiltrating ア ッ セ イ と し て Matrigel チ ャ ン バ ー を with い て, serum を cause tonic と し て lower に mobile す る cells を し た. The infiltration efficiency of <s:1> ノッ アウト アウト cells で parent cells <s:1> increases by 2 times に, and the <s:1> て た た た た. は heterogeneity of cancer tissue な cells sets 団 で あ る が, TP63 発 now low が し て EMT を す cells は set 団 な infiltrating を pilot す る こ と が recently reported さ れ, そ の 観 examine と consistent し て い る. さ ら に cause cell と し て シ ュ ワ ン cells に origin す る cell lines を with い る infiltrating ア ッ セ イ の conditions を beg し 検 た.

项目成果

TP63(p63) knockout induces epithelial mesenchymal transition through DNA methylation control in squamous cell carcinoma

TP63(p63)敲除通过DNA甲基化控制鳞状细胞癌诱导上皮间质转化

• 发表时间: 2022
• 作者: Iyoko Katoh;Ryu-Ichiro Hata;and Shun-ichi Kurata
• 通讯作者: and Shun-ichi Kurata