Brain hypothermia focusing on erythropoietin and microglial activation control

脑低温关注促红细胞生成素和小胶质细胞激活控制

• 批准号: 22K09168
• 负责人: 田村 哲也
• 金额: $ 2.25万
• 依托单位: Nagoya City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09168/
• 关键词: ミクログリア; 低体温療法; 蘇生後脳症; エリスロポエチン; エリスロポエチン受容体; 脳低温療法; 脳保護

蘇生後脳症モデルラットの作製を行なった。Rice vannucchi法に従い、生後7日齢ラット左総頚動脈結紮の後に低酸素負荷を加えることで一側性に脳傷害を誘導できた。モデルラットに実験的低体温療法を施した後、フローサイトメトリー（FACS）を用いたミクログリアの分取を試みたが、FACSの過程でミクログリアを含む神経系細胞の生存率が大幅に減少し、十分な細胞数を分取することができなかった。そこで、immunopanning法による分取を行なった。immunopanning法は細胞表面マーカー抗体で標識した後、2次抗体をコーティングしたペトリディッシュに播種することで分取する方法である。分取したミクログリアについて、細胞種特異的遺伝子の発現解析により特異的な分取に成功したことを確認した。遺伝子発現解析の結果、傷害性因子であるiNOSや炎症性サイトカインの発現が強く誘導されていた。さらに、低体温療法群ではこれらの傷害性因子の発現誘導が抑制された。一方で、抗炎症性サイトカインの発現は低体温療法により誘導された。これらの遺伝子変化は脳組織をバルクで解析した際には検出できなかったものであり、ミクログリアを分取して解析することに大きな意義があった。EPORの遺伝子発現解析の結果、モデルラット由来のミクログリアではEPOR発現が減弱し低体温療法により発現が回復する傾向がみられた。よって、低体温療法とEPO投与を併用することで脳保護効果を増強できる可能性が考えられた。初代培養ミクログリアに虚血再灌流モデル刺激を加えてEPORの発現解析を行なった。同様にEPOR発現減少傾向がみられたが、モデルラットの結果と比較すると変化は小さく、EPORの発現減少には虚血再灌流がミクログリアに直接与える影響と、ミクログリア以外の細胞から放出される液性因子の両方が関与している可能性が示唆された。

Post-supractic 脳 syndrome モデ モデ ラット ラット を control を actions なった. Rice vannucchi に 従 い, postnatal 7 齢 ラ ッ ト left 総 頚 artery ligation after の に を with low acid element load え る こ と で side sex に 脳 induced damage を で き た. モ デ ル ラ ッ ト に be 験 hypothermia therapy を し shi, after た フ ロ ー サ イ ト メ ト リ ー (both FACS) を い た ミ ク ロ グ リ ア の divide を try み た が, both FACS の process で ミ ク ロ グ リ ア を cells contain む 経 god is の survival が sharply に several を し, very な cells divide す る こ と が で き な か っ た. Youdaoplaceholder0 で で and immunopanning による are separated into を lines なった. Immunopanning method は cell surface マ ー カ ー antibody で logo し た antibodies, 2 times after を コ ー テ ィ ン グ し た ペ ト リ デ ィ ッ シ ュ に seeding す る こ と resale rights exist で す る method で あ る. Divide し た ミ ク ロ グ リ ア に つ い て, cell species specific heritage 伝 son の 発 now parse に よ り specific な divide に successful し た こ と を confirm し た. Heritage 伝 発 analytical の results now, harmful factor で あ る iNOS や inflammatory サ イ ト カ イ ン の 発 now strong が く induced さ れ て い た. Youdaoplaceholder0, hypothermia therapy group で れら れら れら the occurrence of harmful factors <e:1> induces が inhibition された. One party で, anti-inflammatory サ トカ トカ <s:1> <s:1> occurrence <s:1> hypothermia therapy によ サ サ induction された. こ れ ら の heritage 伝 sub - the は 脳 organization を バ ル ク で parsing し た interstate に は 検 out で き な か っ た も の で あ り, ミ ク ロ グ リ ア を divide し て parsing す る こ と に big き な meaning が あ っ た. Traces of EPOR の 伝 発 analytical の results now, モ デ ル ラ ッ ト origin の ミ ク ロ グ リ ア で は EPOR 発 now weakened が し hypothermia therapy に よ り 発 reply now が す る tendency が み ら れ た. よ っ て, hypothermia therapy と cast with EPO を and す る こ と で 脳 protection services fruit を raised strong で き る possibility が exam え ら れ た. The first-generation culture of <s:1> ログリアに, reperfusion of deficient blood モデ, モデ, えて, stimulation of を plus えて, EPOR, <s:1>, occurrence analysis を, なった. With others in に EPOR 発 now reduce tendency が み ら れ た が, モ デ ル ラ ッ ト の results と す る と small variations change は さ く, EPOR の 発 now reduce に は empty blood perfusion が ミ ク ロ グ リ ア に directly with え る influence と, ミ ク ロ グ リ ア の cells か ら release さ れ る liquidity factor の struck party が masato and し て い が る possibility in stopping さ れ た.

项目成果

Hypothermic culture enhances secretion of astrocyte-derived neuroprotective erythropoietin.

低温培养可增强星形胶质细胞衍生的神经保护性促红细胞生成素的分泌。

• 发表时间: 2022
• 作者: 鳥内皐暉;垣田博樹;青木啓将;田村哲也;竹下覚;山田恭聖;青山峰芳
• 通讯作者: 青山峰芳

心停止蘇生後脳症に対する体温管理療法の脳保護作用機序の検討～低温培養がミクログリアの活性化へ及ぼす影響～

心脏骤停复苏后脑病温度管理疗法的脑保护机制探讨~低温培养对小胶质细胞活化的影响~

• 发表时间: 2022
• 作者: 田村哲也;太田晴子;志田恭子;藤掛数馬;加古英介;祖父江和哉
• 通讯作者: 祖父江和哉