小児大腿骨頭壊死症の線維化を中心とした病態解明と新規骨再生促進薬の開発

以纤维化为中心的小儿股骨头坏死病理阐明及新型促骨再生药物开发

基本信息

批准号：
22K09304
负责人：
三島健一
金额：
$ 2.66万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2022
资助国家：
日本
起止时间：
2022-04-01 至 2025-03-31
项目状态：
未结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09304/
关键词：
骨壊死 Runx2 骨形成促進薬線維化 de novo創薬ペルテス病化合物ライブラリー

项目摘要

今期はTLR4拮抗薬であるLPS-RSの虚血性骨壊死に対する効果を調べた。実験はマウスの大腿骨遠位顆部を栄養する主要な血管4本を顕微鏡にて同定し、これらをすべて凝固焼灼して虚血性骨壊死を誘導する動物モデルを使用して行った。馴化した12週齢のC57BL/6雄マウスの左後肢に上記の手術操作を施し、術翌日から週に2回、4週間、LPS-RS 5 mg/kg (薬剤投与群)およびVehicle（対照群）の腹腔内投与を行った。実験中に削痩や脱毛を生じることはなかった。術後2、4、６週で安楽死させ、左後肢から膝関節を残したまま大腿骨と脛骨を採取し、HE染色やTRAP染色による組織学的評価やマイクロCTによる形態学的評価を行った。術後2週時点では、壊死骨端における骨梁内empty lacunaeの個数には両群間に有意差を認めなかった。マイクロCTで定量評価した壊死骨端内の海綿骨の骨密度にも有意差はみられなかった。一方、薬剤投与群の方が組織学的には壊死骨端内の破骨細胞数は多い傾向がみられた。最終評価では術後6週時点では、壊死骨端の圧潰度に明らかな違いは確認されなかった。Runx2は未分化間葉系細胞からの骨芽細胞分化に必須の転写因子である。今期はRunx2の発現や転写活性化能を上昇させ、骨芽細胞分化や骨形成を促進させ得る化合物スクリーニングを開始した。ヒトRunx2遺伝子の骨芽細胞分化に関わるP1プロモーター領域をサブクローニングしたルシフェラーゼベクターを安定発現する未分化間葉系細胞株を樹立し、スクリーニングを行った。一次スクリーニングには名古屋大学トランスフォーマティブ生命分子研究所 (ITbM)から供与を受けた800種類の基本骨格化合物を使用した。3回試行を行ったところ、16種類の化合物はランソプラゾールよりも高いプロモーター活性を示した。

这个季节，我们研究了TLR4拮抗剂LPS-RS对缺血性骨坏死的影响。实验是使用动物模型进行的，在该模型中，在显微镜下鉴定出四个主要的血管供小鼠远端的小鼠，所有血管都凝结并凝结以诱导缺血性骨质症。上述手术手术是在12周大的男性C57BL/6小鼠的左后肢上进行的，并在手术后每周两次两次。实验期间没有皮肤或脱发。手术后的2、4和6周将患者安乐死，并用左后腿剩余的膝关节收集股骨和胫骨，并使用He染色和捕获染色进行组织学评估，并使用MicroCT进行形态学评估。术后2周，两组在坏死性外周期中的空腔数中没有观察到显着差异。通过Microct定量评估的坏死性表皮内的取消骨的骨密度也没有显着差异。另一方面，组织学表明，在药物管理组中，坏死性外周期内的破骨细胞数量较高。最终的评估未证实术后6周的坏死性外周期塌陷程度明显差异。 runx2是与未分化的间充质细胞分化成骨细胞的基本转录因子。这个季节，我们开始筛选化合物，可以提高Runx2的表达和转录激活能力，并促进成骨细胞分化和骨形成。建立并筛选了一个稳定地表达荧光素酶载体的未分化的间充质细胞系，该细胞系已与参与人Runx2基因成骨细胞分化的P1启动子区域亚克隆。为了进行初级筛查，Nagoya大学的转型生物分子研究所（ITBM）提供了800种基本骨骼化合物。三项试验表明，16种化合物比兰索拉唑表现出更高的启动子活性。