Development of new therapy for urinary incontinence by mitophagy activation of urethral rhabdosphincter

通过尿道横纹括约肌线粒体自噬激活治疗尿失禁的新疗法

• 批准号: 22K09532
• 负责人: 三股 浩光
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09532/
• 关键词: 外尿道括約筋; 尿失禁; 横紋筋幹細胞; マイトファジー; オートファジー

外尿道括約筋は膜様部尿道を取り囲む横紋筋で、尿禁制に寄与しているが、加齢とともに脆弱化し、尿失禁の一因となる。本研究では、まず透過型電子顕微鏡によるヒト外尿道括約筋の異常ミトコンドリアの蓄積を検討し、異常ミトコンドリアの除去機構であるマイトファジーについて検討を行った。インフォームド・コンセントの得られた膀胱全摘症例より、手術時に外尿道括約筋組織と腹直筋組織を採取し、電子顕微鏡標本作成及び分子学実験用に処理を行った。組織学的実験は両組織を2％グルタールアルデヒド固定液で保存し電子顕微鏡ブロックを作成した。また分子生物学的実験用に、採取した組織をディープ・フリーザーにて保存した。組織学的実験はこれまでに7例の電子顕微鏡標本を作製した。2例については外尿道括約筋組織と腹直筋組織の透過型電子顕微鏡写真が得られており、外尿道括約筋組織は腹直筋組織と比べて、筋束に隙間が多く、ミトコンドリア数の減少や空洞化・膨化を認め異常ミトコンドリアの蓄積が示唆された。また筋線維別に外尿道括約筋におけるミトコンドリア異常についても観察された。また細胞学実験では膀胱全摘症例より、手術時に外尿道括約筋組織外尿道括約筋の微量組織を細切し、コラゲナーゼ処理後に初代培養を行った。分離培養した外尿道括約筋幹細胞にCSII-CMV-CDK4R24C、CSII-CMV-cyclin D1 及びCSII-CMV-TERTを遺伝子導入した。さらに横紋筋幹細胞マーカーであるCD56（NCAM）に対する蛍光抗体を用いてフローサイトメーターによって横紋筋幹細胞を分離し長寿化細胞株を樹立した。これまでに8例の外尿道括約筋組織の初代培養を行っており、4例に長寿化遺伝子を導入して3例の長寿化細胞株を樹立した。これらの細胞株について分化・増殖実験を行い横紋筋に分化することを確認した。

External urethral enclosed muscle は film about others of urethra を take り 囲 む horizontal grain reinforced で, urine banned に send し て い る が, 齢 と と も に fragile し, incontinence の due to と な る. This study で は, ま ず type through electronic 顕 micromirror に よ る ヒ ト urethral outside around about abnormal muscle の ミ ト コ ン ド リ ア の accumulation を beg し, abnormal 検 ミ ト コ ン ド リ ア の remove institutional で あ る マ イ ト フ ァ ジ ー に つ い て 検 line for を っ た. イ ン フ ォ ー ム ド · コ ン セ ン ト の have ら れ た bladder disease cases full and よ り に when the operation, external urethral enclosed about muscle tissue と rectus muscle tissue を take し, electronic 顕 micromirror specimen is made and be molecular び 験 with に 処 Richard を line っ た. Histological be 験 は struck organization を 2% グ ル タ ー ル ア ル デ ヒ ド fixed liquid で save し 顕 micromirror ブ ロ ッ ク を made し た. ま た molecular biology be 験 に, take し た organization を デ ィ ー プ · フ リ ー ザ ー に て save し た. Histological experiment れまでに れまでに7 <s:1> electronic 顕 microendoscope specimens を preparation <s:1> た. 2 cases に つ い て は urethral outside around about muscle tissue と rectus muscle tissue の type through electronic 顕 micro mirror photo が very ら れ て お り, external urethral enclosed about muscle tissue は rectus muscle tissue と than べ て, reinforced beam に interstitial が く, ミ ト コ ン ド リ ア reduced の や hollowing out, puffing を recognize abnormal め ミ ト コ ン ド リ ア の accumulation が in stopping さ れ た. ま た muscle line d don't に urethra enclosed about jin に お け る ミ ト コ ン ド リ ア abnormal に つ い て も 観 examine さ れ た. ま た cytology be 験 で は bladder disease cases full and よ り に when the operation, external urethral enclosed about outside urethral muscle tissue around about jin の trace organization を fine cut し, コ ラ ゲ ナ ー ゼ 処 Richard に after original line cultivate を っ た. The を progeny 伝 of <s:1> た external urethra crascus stem cells にCSII-CMV-CDK4R24C, CSII-CMV-cyclin D1 and びCSII-CMV-TERT were isolated and cultured and introduced into <s:1> た. さ ら に transverse striation muscle stem cells マ ー カ ー で あ る CD56 (NCAM) に す seaborne る 蛍 を light antibody with い て フ ロ ー サ イ ト メ ー タ ー に よ っ て transverse striation muscle stem cells を separation of long life cell lines を し set し た. こ れ ま で に 8 cases of urethral outside の enclosed about muscle tissue の original line cultivate を っ て お り, 4 cases of long life but 伝 に を import し て 3 cases of long life cell lines を の set し た. The <s:1> れら <s:1> cell line に に て て て differentiation and proliferation experiment を row <s:1> transverse striated tendon に differentiation する とを とを confirmation of た た.