Development of new therapy for urinary incontinence by mitophagy activation of urethral rhabdosphincter

通过尿道横纹括约肌线粒体自噬激活治疗尿失禁的新疗法

• 批准号: 22K09532
• 负责人: 三股 浩光
• 金额: $ 2.66万
• 依托单位: Oita University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2022
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2022-04-01 至 2025-03-31
• 项目状态: 未结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-22K09532/
• 关键词: 外尿道括約筋; 尿失禁; 横紋筋幹細胞; マイトファジー; オートファジー

外尿道括約筋は膜様部尿道を取り囲む横紋筋で、尿禁制に寄与しているが、加齢とともに脆弱化し、尿失禁の一因となる。本研究では、まず透過型電子顕微鏡によるヒト外尿道括約筋の異常ミトコンドリアの蓄積を検討し、異常ミトコンドリアの除去機構であるマイトファジーについて検討を行った。インフォームド・コンセントの得られた膀胱全摘症例より、手術時に外尿道括約筋組織と腹直筋組織を採取し、電子顕微鏡標本作成及び分子学実験用に処理を行った。組織学的実験は両組織を2％グルタールアルデヒド固定液で保存し電子顕微鏡ブロックを作成した。また分子生物学的実験用に、採取した組織をディープ・フリーザーにて保存した。組織学的実験はこれまでに7例の電子顕微鏡標本を作製した。2例については外尿道括約筋組織と腹直筋組織の透過型電子顕微鏡写真が得られており、外尿道括約筋組織は腹直筋組織と比べて、筋束に隙間が多く、ミトコンドリア数の減少や空洞化・膨化を認め異常ミトコンドリアの蓄積が示唆された。また筋線維別に外尿道括約筋におけるミトコンドリア異常についても観察された。また細胞学実験では膀胱全摘症例より、手術時に外尿道括約筋組織外尿道括約筋の微量組織を細切し、コラゲナーゼ処理後に初代培養を行った。分離培養した外尿道括約筋幹細胞にCSII-CMV-CDK4R24C、CSII-CMV-cyclin D1 及びCSII-CMV-TERTを遺伝子導入した。さらに横紋筋幹細胞マーカーであるCD56（NCAM）に対する蛍光抗体を用いてフローサイトメーターによって横紋筋幹細胞を分離し長寿化細胞株を樹立した。これまでに8例の外尿道括約筋組織の初代培養を行っており、4例に長寿化遺伝子を導入して3例の長寿化細胞株を樹立した。これらの細胞株について分化・増殖実験を行い横紋筋に分化することを確認した。

The outer urethra is made up of a thin layer of the urethra, and a thin layer of the urethra. In this study, the accumulation and removal mechanism of abnormal urinary tract contractions were investigated by transmission electron microscopy. All bladder tissues were collected during surgery, and the results were analyzed by electron microscopy and molecular analysis. Histological examination of the tissue was carried out in 2% of the fixative solution. The application of molecular biology 7 Cases of Microscopic Microscopy in Histology In 2 cases, the transmission electron microscope photographs of the external urethral sphincter tissue and the abdominal straight tendon tissue were obtained, and the external urethral sphincter tissue and the abdominal straight tendon tissue were compared. The interspace between the tendon bundles was increased, and the number of cavities was reduced. The expansion was recognized as abnormal. The accumulation of cavities was observed. The muscle line dimension of the external urethra is different from that of the external urethra. Cytological examination of complete bladder extraction cases, surgical procedures for the external urethral sphincter tissue, external urethral sphincter tissue micro-tissue micro-dissection, initial culture after treatment CSII-CMV-CDK4R24C, CSII-CMV-cyclin D1 and CSII-CMV-TERT genes were introduced into isolated and cultured human urethral muscle stem cells. CD56 (NCAM) was used to isolate and establish long-lived cells from striated muscle stem cells. Among them, 8 cases were cultured in primary culture, 4 cases were introduced with longevity gene, and 3 cases were established with longevity cell line. The cell lines were differentiated and propagated.