生体内系譜追跡による脂肪由来幹細胞の機能解析に基づく新規再生医療の開発

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Prx1発現細胞特異的にCre recombinaseを発現するPrx1Creマウスと、Cre recombinaseを発現した細胞において赤色蛍光色素Ai14を発現するRosa26-LSL- tdTomatoマウス(Ai14マウス)、I型コラーゲン発現細胞がEGFPを発現するCol1/EGFPマウスを交配することにより、Prx1発現細胞に由来する細胞がtdTomatoを恒久的に発現し、なおかつI型コラーゲン発現細胞がEGFPを発現するPrx1Cre;Ai14;Col1/EGFPマウス(PAGマウス)を作製した。PAGマウスの鼠径脂肪より脂肪由来幹細 胞(tdTomato陽性ADSCs)を抽出・培養し、温度反応性ディッシュを用いて脂肪由来幹細胞シート(tdT-ADSCシート)を作製した。続いて、マウスの頭蓋骨欠損モデルの確立を試みた。様々な方法を試したが、操作による致死率が高く、作製に難渋した。かろうじて成功した8週齢のマウスに対し、予備実験としてtdT-ADSCシートを移植し、4週後の創部の組織を蛍光顕微鏡で観察したが、tdTomato陽性はごくわずかしか残存していなかった。また、マウス背部の皮膚欠損創モデルを作製し、tdT-ADSCシートを移植した。移植群はコントロール群よりも創治癒が早い傾向があった。移植後の創部を移植1,4週間後に蛍光免疫染色にて観察したところ、1週後の組織にはtdTomato陽性GFP陽性の細胞を認め、移植したtdTomato陽性ADSCsが皮膚の創傷治癒過程におけるコラーゲン生成に寄与していることが示された。しかし、4週後の組織ではtdTomato陽性GFP陽性の細胞は減少していた。