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腫瘍幹細胞マーカーＤｃｌｋ１を用いた大腸癌治療への発展

利用肿瘤干细胞标记物Dclk1开发结直肠癌治疗方法

基本信息

批准号：
13J02261
负责人：
中西祐貴
金额：
$ 1.77万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for JSPS Fellows
财政年份：
2013
资助国家：
日本
起止时间：
2013 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-13J02261/
关键词：
消化管幹細胞抗体療法癌幹細胞 Dcamkll

项目摘要

人体を脅かす癌組織には少数の「腫瘍幹細胞」が存在し、癌の形成や発展にとどまらず、癌の治療抵抗性や転移にも関与していると考えられている。すなわち、現行の抗癌剤治療では一時的に癌が縮小しても、「腫瘍幹細胞」を除去しきれないために、癌の再発をきたすとされ、腫瘍幹細胞を標的とする治療法開発の必要性が高まっている。また、腫瘍幹細胞を特異的に標的とすることは、正常組織に副作用がない理想的な癌治療につながる可能性がある。これまでに申請者らは、マウス腸腫瘍モデルにおいてDclk1が腫瘍幹細胞の特異的マーカーであること、そしてDclk1を発現する腫瘍幹細胞を除去することで、正常組織に影響を及ぼすことなく腸腫瘍が退縮することを示してきた。本研究課題は、マウスモデルで認めた抗腫瘍効果をヒト癌にも適用するために、Dclk1を標的とした抗体医療および癌免疫療法の可能性を検討することである。Dclk1は大部分が細胞質内に存在するが、C末端部を細胞外に露出させていることに着目した。正常腸管において、Dclk1は大部分が細胞質内微小管領域に存在するとされるが、細胞外にC末端部位を露出させており、ソーティングが可能と報告されている(May R, Stem Cells, 2009)。そこでまず本年度は、C末端部に対するマウスモノクローナル抗体の作製に取り掛かった。マウスDclk1のC末端アミノ酸配列をコードするcDNAよりリコンビナントタンパクを合成した。そして、同リコンビナントタンパクにより免疫したマウスの膝窩リンパ節細胞を採取し、P3U1骨髄腫細胞と融合させることによりハイブリドーマを形成に成功した。得られたハイブリドーマをHAT培地で培養、選別し、クローン化を行った。親和性の高いクローンをELISA、ウエスタン・プロッティング法で選択し、ハイブリドーマ・クローンを樹立、モノクローナル抗体の作製に成功した。

A small number of tumor stem cells exist in human cancer tissues, and cancer formation and development are related to cancer treatment resistance and migration. The current anticancer drug therapy is highly necessary for the development of therapeutic methods that target tumor stem cells, reduce cancer size, remove tumor stem cells, and regenerate cancer. Stem cells are targeted specifically for cancer, and normal tissues are targeted for side effects. The applicant has been asked to remove the tumor stem cells from the tissue. This study aims to explore the potential of anti-tumor therapy and cancer immunotherapy. Most of Dclk1 is present in the cytoplasm, and the C-terminal part is exposed outside the cell. In normal gut, Dclk1 is mostly present in cytoplasmic microtubule domains, while extracellular C-terminal sites are exposed, possibly reported (May R, Stem Cells, 2009). This year, the C-terminal part of the antibody was selected. C-terminal amino acid sequence of Dclk1 P3U1 osteoma cells fused successfully with P3U1 osteoma cells HAT culture, selection and transformation Affinity of the high level of the enzyme ELISA, the enzyme detection method to select, the enzyme detection method to establish, the enzyme detection method to produce antibodies successfully