アレルギー性炎症における線維芽細胞活性化の時空間的制御機構の解明

阐明过敏性炎症中成纤维细胞活化的时空控制机制

• 批准号: 15K09552
• 负责人: 有馬 和彦
• 金额: $ 3万
• 依托单位: Saga University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2015
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2015-04-01 至 2016-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-15K09552/
• 关键词: アレルギー; 細胞・組織; 動物; 免疫学

申請者らは近年，アレルギー性炎症を含む各種慢性炎症性疾患において細胞外マトリックスタンパク質の一種ペリオスチンが線維芽細胞より過剰に産生され，炎症病態を増悪化させることを見出した。本研究はペリオスチン産生線維芽細胞の特徴を明らかにし，ペリオスチンを標的としたアレルギー性炎症および組織線維化疾患治療戦略の基盤確立を目的として開始した。研究初年度においては①ペリオスチン遺伝子(Postn)のゲノム改変実施の予備検討，②Postnの発現調節機構を明らかにするための線維芽細胞株を用いたPostnプロモーターの転写制御解析を目標と設定した。まず，ゲノム改変実験系の確認のため，例としてマウスPostn遺伝子を破壊するためのCRISPR/Cas9コンストラクトを作成し，線維芽細胞株において実際にPostn遺伝子の特定の領域に変異を導入することが可能であるか確認した。その結果，Postn遺伝子の2アリルのうちいずれかのアリルへの変異導入は約半数の細胞で行えていた。両アリルともナンセンス変異が導入されていた細胞は解析した11細胞株中1細胞のみ（約9%）であった。実際にこれらの細胞におけるペリオスチンタンパク質の産生低下がELISA法にて確認された。一方，Postnプロモーターの転写制御解析はヒトPOSTN遺伝子の5'UTR領域約5100塩基をルシフェラーゼ遺伝子の上流に組み込んだレポーター遺伝子を構築し，ヒト細胞株を用いて実施した。組み込む5'UTR領域を徐々に短くしていくことによってPOSTN遺伝子におけるIL-13依存的転写制御に強く寄与している領域を同定した。また、既知のある転写因子の結合配列に相当する領域に点変異を導入したレポーター遺伝子では同転写活性能が著しく障害されることも見出すことができ，IL-13依存的なPOSTN遺伝子の転写制御機構を明らかにしつつある。

Applicant: In recent years, it has been shown that allocaryngeal inflammation, a kind of selective hormone in extracellular matrix associated with various chronic inflammatory diseases, is caused by excessive production of linear germ cells, and the inflammatory pathology has increased. This study is aimed at identifying the characteristics of cells that produce lineal cells and establishing the basis for treatment of lineal inflammation and tissue maintenance disorders. At the beginning of the study,(1) the preparation of the post-production control system,(2) the development and regulation mechanism of post-production control system, and (3) the purpose of post-production control analysis were discussed. For example, the CRISPR/Cas9 database was created to allow the introduction of Postn gene into a specific domain of a cell line. As a result, Postn gene 2 was introduced into about half of the cells. In addition, 1 cell out of 11 cell lines (about 9%) was analyzed. In fact, the production of low protein in cells was confirmed by ELISA. On the other hand, the analysis of POSTN gene 5'UTR domain is about 5100 bp, and the upstream group of POSTN gene is constructed. The cell line is used in the process of construction. The 5'UTR domain is composed of the POSTN domain and the IL-13 dependent domain. In addition, the combination of known writing factors and the corresponding field differences are introduced into the same writing performance of the POSTN gene, which is dependent on IL-13.

项目成果

2型サイトカインに対する分子標的戦略の基盤

2 型细胞因子分子靶向策略的基础

• 发表时间: 2015
• 作者: Takeuchi M;Fukuda M;Ushio H;Kawasaki J;Niyonsaba F;Okumura K;Ikeda S;Ogawa H.;有馬 和彦，出原 賢治;Kenji Izuhara et al.;出原賢治，太田昭一郎，白石裕士，有馬和彦，鈴木章一;Kenji Izuhara et al.;有馬和彦
• 通讯作者: 有馬和彦