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ヒト骨化黄色靭帯由来培養細胞を用いた骨化伸展制御因子の特定

使用源自人骨化黄韧带的培养细胞鉴定调节骨化延伸的因素

基本信息

批准号：
26462234
负责人：
馬場久敏
金额：
$ 3.08万
依托单位：
University of Fukui
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
财政年份：
2014
资助国家：
日本
起止时间：
2014-04-01 至 2015-03-31
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-26462234/
关键词：
脊柱靭帯骨化症骨化伸展マイクロアレイ靭帯培養細胞

项目摘要

脊柱靭帯骨化巣の進展様式は内軟骨骨化の形態をとるといわれている。本研究では、手術時に採取した後縦靭帯骨化もしくは黄色靭帯骨化の病巣を含んだ骨化靭帯組織を利用して、骨化前線部の細胞の持つ遺伝子特性について研究した。マイクロアレイ解析では、骨化巣を含むサンプルでIhh、Runx 2の遺伝子発現の増加がみられ、その他、Ihh signalingのGLI2, GLI3やSox9, BMP2, VEGF, COL 11 A2などの遺伝子発現の上昇がみられた。また、Hedgehog signalingの pathway解析ではIhh、受容体であるGLI2、GLI3、PTCHを含む7個の遺伝子の発現上昇が確認できた。骨化巣から得た培養細胞にcyclic tensile strainを加えたところ、Ihh signalingに関与する遺伝子の発現変化が確認でき、またWestern Blotting法でタンパク発現量での半定量的評価では、cyclic tensile strainによるタンパク発現の増加がみられた。免疫組織学的な検討では、Ihh、Sox9は前肥大軟骨細胞、Runx2は肥大軟骨細胞で陽性細胞が多く観察できた。PTHrPは前肥大軟骨細胞、肥大軟骨細胞層に多く見られ、GLI2、GLI3は前肥大軟骨細胞層に陽性細胞が多くみられた。四肢の内軟骨骨化で重要な役割を果たすIhh signalingのcyclic tensile strainによる発現亢進が骨化巣進展に関与している可能性が考えられた。

The development of spinal cartilage ossification In this study, we studied the characteristics of the cells in the front line of ossification by using the ossification tissue after the ossification. Ihh, Runx 2, GLI 2, GLI 3, Sox 9, BMP 2, VEGF, COL 11 A2, GLI 3, Sox 9, BMP 2, VEGF, COL 11 A2, GLI3, Sox9, BMP2, VEGF, COL 11 A2, GLI3, SOX9, BMP2, COL 11 A2, COL 1 The pathway analysis of Hedgehog signaling is confirmed by the presence of 7 genes in the receptor, GLI2, GLI3 and PTCH. The increase in cyclic tensile strain in cultured cells obtained from ossification has been confirmed, and the change in the expression of genes related to Ihh signaling has been confirmed. In addition, the semi-quantitative evaluation of the amount of protein detected by Western Blotting has been confirmed, and the increase in the expression of protein in cyclic tensile strain has been confirmed. Immunohistologically, the positive cells of Ihh, Sox9 and Runx2 hypertrophic chondrocytes were detected. PTHrP was found in many hypertrophic chondrocytes and hypertrophic chondrocytes, and GLI2 and GLI3 were found in many hypertrophic chondrocytes. An investigation into the possibility of hyperosteogeny in the development of cartilage ossification in the extremities