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化学発光を触媒するモノクローナル抗体の作製-新しい発光性人工タンパク質の創出-

催化化学发光的单克隆抗体的生产-新型发光人工蛋白质的制作-

基本信息

批准号：
08878086
负责人：
小田順一
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究は、化学発光を触媒するモノクローナル抗体を作製し、超高感度なイムノアッセイやマーカータンパクとして遺伝子工学に広く応用できる操作性を備えた新しいタイプの発光性人工タンパク質を作り出すことを目的としたものである。まず、抗体に触媒させる化学発光として、発光効率が高くしかも持続性の化学発光を示すジオキセタンの熱分解に注目し、βシアノエチル炭酸エステルを保護基とし、立体的にかさ高いアダマンチルフェニルジオキセタン誘導体を7ステップで合成した。この化合物は、アンモニアなどのアルカリ処理によりβ脱離をおこし、持続性の化学発光を開始することを確かめた。さて、このβシアノエチル炭酸エステルをβ脱離により切断し、ジオキセタンの分解による化学発光を誘発する活性を持った抗体を作製するために、β位プロトンを引き抜きアンチ脱離を触媒する塩基性官能基を誘導する目的で、β脱離の遷移状態アナログとなるトロパン骨格を有するハプテンを13ステップで合成した。得られたハプテンとKLHとの複合体を用いてBALB-cマウスを免疫し、通常のハイブリドーマ法を用いてハプテンに特異的なモノクローナル抗体を産生するクローン54種類を得た。それぞれのクローンを大量培養し、培養上清からそれぞれのモノクローナル抗体を精製し、先に合成したアダマンチルフェニルジオキセタン誘導体を基質に、ルミノメーターを用いた発光アッセイに供したところ、いずれの抗体も発光活性は認められなかった。このことは、用いたハプテンによっては、シアノエチル基を切断する抗体を誘導することができなかったことを示している。そこで、同じハプテンを用いた新たな免疫を断念し、発光反応そのものをジアリールシュウ酸エステルを用いた過シュウ酸エステル化学発光反応に変え、従来から使用例の多いリン酸エステル系のハプテンを合成し、シュウ酸エステルの加過酸化水素分解による化学発光を触媒する抗体を作製中である。

In this study, the chemical photocatalyst, the antibody, the antibody and the antibody. Antibody catalyst, chemical photoluminescence, high photoluminescence, high photoperiod, high temperature, high temperature, high temperature, The chemical compounds, the chemical compounds, the chemical compounds and the chemical photosensitizers. Carbonic acid, β-carbonic acid, β-desorption, dissociation, chemical photoluminescence, bioactivity, anti-carbonic acid, β-carbonic acid, β The β-detachment is located in the bone lattice, and there is a compound in the bone lattice. The KLH complex was successfully immunized with BALB-c vaccine, and the specific antibody was used in general. The antibody was cloned into E. coli 54. The supernatant was cultured in large quantities, the supernatant was incubated in the supernatant, the antibody was purified, the antibody was synthesized, the antibody was detected, the antibody was detected, and the antibody was detected. Please tell me that the antibody was cut off and that the antibody was cut in the first place. In the same way, in the same way, the new immune system was used in the same way, and the chemical reaction was used in the chemical reaction system. The acid was added by acidified water decomposition, the chemical photolysis catalyst, the antibody was used in the process.