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実験動物の遺伝子純度の測定と純系度の解析

实验动物遗传纯度测定及纯度分析

基本信息

批准号：
08878162
负责人：
近藤壽彦
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Gunma University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1997
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08878162/
关键词：
実験動物遺伝子純度純系度雄特異的遺伝子基本転写因子

项目摘要

1.Primer/Linkerハイブリッド切断(PLHD)法を新たに開発し、純系度の高いDBA/2マウスで雄雌の遺伝子サブトラクションを行い、雄特異的遺伝子ライブラリーを作製した。先ず、雄ゲノムDNAをEco RI、雌ゲノムDNAをMboIで夫々断片化した後、Eco RI断片の両端にEco RI-Primer/Linkerを連結させ、雄の増幅Eco RIライブラリーを作製した。これに、10^3〜10^4過剰量の雌Mob I断片を加えてハイブリダイゼーション反応を行った。6種の4塩基認識酵素でハイブリッドを切断後、Eco RI-PrimerでPCR増幅させて雄特異的遺伝子ライブラリーを作製した。雄特異的遺伝子であるmSRY遺伝子及び雌雄共通に存在する遺伝子であるβ-actin遺伝子によってPLHD法の各ステップを解析した結果、最終ライブラリーには雄特異的遺伝子が高純度に濃縮していることが判明した。2.マウス精子形成過程における遺伝子差異を蛍光ディファレンシャル・ディスプレー(FDD)法で解析し、半数体特異的な新しいタイプの基本転写因子(TFIIA-τ)をクローニングした。雄のBALB/cマウスの精巣からエルトリエーターとセルソーターとを用いて高純度の精細胞を単離し、mRNAを調製した。成熟及び未成熟(17日齢)マウス精巣からも同様にしてmRNAを調製した。40種類の任意primerを用いるFDD法による比較から、精細胞で半数体特異的に発現する約500種類のcDNA断片を同定した。そのうち含有量の高い7種のcDNA断片をクローニングしたところ、4種が既知の遺伝子と高い相同性を示したので、5′-RACE法によって基本転写因子TFIIAと相同性の高いcDNA(TFIIA-τと命名)の全塩基配列を決定した。この遺伝子は、精巣で半数体特異的に発現し、他の組織では全く発現が見られなかった。また、発現量は高く、従来知られているTFIIAのそれより約2桁も高かった。興味あることに精巣では、TBP、TFIIBなど他の基本転写因子も同様に高く発現していることが判明し、精巣特異的な転写調節機構の存在が強く示唆された。精子形成には、TFIIA-τが転写調節の主役を演じている可能性が高い。

1.Primer/Linker cutting (PLHD) method is new and pure, and the degree of purity is high. BA/2 マウスで男女の伝子サブトラクションを行い, 男specific 伝子ライブラリーをした. First, male ゲノムDNAをEco RI, female ゲノムDNAをMboIで夫々fragmentationした后, Eco RI fragment の両ENDにEco RI-Primer/Linkerをconnectionさせ, male のenlarged Eco Made by RIライブラリーを.これに, 10^3~10^4 excessive amount of female Mob I fragments えてハイブリダイゼーションcounter-応を行った. After cutting off the 6 kinds of 4-base recognition enzymes, Eco RI-Primer and PCR amplification were carried out to produce the specific genetic enzymes. Male-specific male-specific male-specific male-specific female genitals and male-specific female male-specific female male-specific male female male-specific female genitals and male and female male-specific female male-specific male female male-specific female genitals and beta-actin male and female male-specific male and female male-specific male female genitals and beta-actin male and female male-specific male and female males and females PLH As a result of D method's various analysis methods, the final high-purity, high-purity, high-purity, concentrated, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, high-purity, and concentrated product of the D-method. 2. The sperm formation process of spermatozoa is a sperm-forming process, and the difference is the sperm formation process (FDD). It is a method of analysis and half-body-specific basic transformation factor (TFIIA-τ). Male BALB/cマウスの精巣からエルトリエーターとセルソーIt is made from high-purity sperm cells isolated from sperm cells and prepared with mRNA. Mature and immature (17th day) MASHIJIJI からも同様にしてmRNAをmodulationした. 40 types of arbitrary primers were compared using the FDD method, and the cDNA fragments of about 500 types of sperm cells that were specific to half of the sperm cells were identified. There are 7 kinds of cDNA fragments in the content of そのうち, 7 kinds of cDNA fragments, 4 kinds of known ones, 5′ -The RACE method is based on the determination of the complete base alignment of cDNA (TFIIA-τ designation) based on the basic writing factor TFIIA and high identity. The この缝子は, the essence of the half body is unique, the に発appears, and his organization is full of く発appears and sees the られなかった.また, 発综合は高く, 従来知られているTFIIAのそれよりabout 2桁も高かった. Xingwei あることに精巣では, TBP, TFIIB など His のBasic writing factor も同様に高くIt is now clear that the existence of a regulating mechanism specific to sperm is strong and strong. The main role of sperm formation and TFIIA-τ's regulation is high.