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光切断性タグを利用する糖鎖分子の細胞内合成

使用光裂解标签进行糖链分子的细胞内合成

基本信息

批准号：
09878116
负责人：
畑中保丸
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1998
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878116/
关键词：
光アフィニティーラベル糖鎖プローブジアリジンカルベン Wittig反応酵素合成切断型スペーサービオチン糖鎖分子糖転移酵素光反応基ジアジリン Friedel-Crafts反応芳香族アルデヒド酵素的合成

项目摘要

【平成10年度の研究実績概要】複雑な糖鎖型の有用プローブを合成する目的に、酵素法を始めとして保護や脱保護の必要がない方法論が検討されている。本研究では、全く新しい萌芽的試みとして、外部から特異的に認識可能な切断性タグを組み込んだ人工基質を用いる糖鎖形成と変換を検討した。1. 切断性光反応基の開発まず、切断可能なタグについて検討した。すでに前年度の成果で、極めて汎用性の高いアルデヒド型のジアリジンが簡単に合成可能となったので、これを用いてWittig反応により桂皮酸型の誘導体とし、切断基を導入するための前駆体をえた。次いで、これを酸化してジオール体へと導き目的の切断型とした。さらに、このものを常法のシスジオール酸化反応にかけると、炭素-炭素結合の開裂により最初の原料が高収率でえられることから、期待通りの切断能を有することも確認した。2. プローブの酵素合成我々が開発した、解析効率化のためのビオチン化プローブ合成を目的に、光反応性のN-アセチルグルコサミンを基質とする酵素反応を検討した。この人工基質は、ガラクトース転移酵素の良好な基質となり、目的のビオチン化ジアリジンを有するN-アセチルラクトサミンプローブを高収率で得た。3. オキシアミン型ジアリジンの開発極めて多種多様の糖鎖構造を効率良く光アフィニティープローブに誘導するには、糖鎖を、無保護のまま利用できる方法の開発が極めて重要である。本年度は、オキムライゲーションを利用し、種々の非放射性光アフィニティープローブが調製可能な実用的試薬を開発した。また、これを種々の糖鎖型プローブ合成に応用し、レクチンの光アフィニティーラベルも検討した。その結果、各々の糖鎖に結合するレクチンがいずれも特異的にラベルされ、非放射性プローブの極めて簡単な合成法を確立した。

[Summary of Research Results for the Year 2010] The purpose of synthesis, enzyme method, protection and deprotection of complex glyco-locked enzymes were discussed. This study is to explore the possibility of genetic modification of artificial substrates by means of a novel germination experiment and a specific external recognition experiment. 1. The opening and closing of the light-reflecting matrix may be detected. The results of the previous year were very useful, and the precursor was introduced. In the middle of the second year, the acid was added to the body and the target was cut off. In addition, it is expected that the cracking rate of carbon-carbon bonds will be confirmed by the normal process of acidification. 2. The enzyme synthesis of the enzyme is discussed in the following aspects: development, analysis, efficiency, enzyme synthesis, objective, photoreactive, N-type, substrate and enzyme reaction. This artificial substrate is a good substrate for the transfer of enzymes, and the target substrate has a high yield. 3. The development of a variety of sugar lock structures is extremely important for the development of sugar lock induction and unprotected utilization methods. This year, the use of non-radioactive light sources to modulate potential applications has been developed. The sugar chain is used in the synthesis of sugar chain and sugar chain. As a result, a simple, non-radioactive synthesis method was established for the combination of various sugar chains.