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糖転移酵素および関連蛋白質の光アフィニティーラベリング

糖基转移酶和相关蛋白质的光亲和标记

基本信息

批准号：
05274209
负责人：
畑中保丸
金额：
$ 1.09万
依托单位：
Toyama Medical and Pharmaceutical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

本研究の目的は、糖転移酵素群の遺伝子レベル、分子レベルでの解明を指向した光アフィニティーラベルを、独自の光アフィニティープローブを用いて実施することにある。これに向け、当該年度は当初の研究計画にしたがって、光反応性の新規糖鎖型プローブを合成し、これを用いる光アフィニティーラベルを検討した。1.糖転移酵素として、シアリルトランスフェラーゼおよびガラクトシルトランスフェラーゼに特異的な糖鎖骨格をリガンド部分とし、これに独自に開発したジアジリン系の光反応基を導入することで、反応性の非常に強いカルベン発生型の試薬へ誘導した。さらに、試薬構造中にはビオチン部分を内蔵させ、アビジン-ビオチン相互作用系を利用して、ラベル蛋白質の高感度検出、単離精製の両段階が特異的に行なえる分子設計の光反応性新規糖鎖型プローブを合成した。2.糖鎖構造がさらに複雑なリガンドについて、その糖鎖部分の合成段階を効率良く行なう新しい方法を検討した。ラクトサミン構造を対象として独自に開発したN-トロフルオロアセチルアミノ糖を基質とする、新しい酵素的合成法の適用を試みた。この結果、糖鎖型プローブ合成に有用な種々のN-トロフルオロアセチルラクトサミン誘導体を、収率良く合成することができた。3.また1.で合成した試薬を用い、実際の応用段階を検討した。ガラクトシルトランスフェラーゼの光アフィニティーラベルを実施し、ラベル結果の解析にビオチンの化学発光検出法を利用することにより、ラジオアイソトープを用いないで、ラベル蛋白質の高感度検出に成功した。

In this study, the purpose of this study is to show that the glycogen transfer enzyme group, the molecular enzyme group, the glucose transfer enzyme group, the glycosyltransferase group, the glycosyltransferase group, the molecular enzyme group, the glycosyltransferase group, the molecular enzyme group, the glucose transfer enzyme group, the glucose transfer enzyme group and the molecular enzyme group were used in this study. In the current year, in the current year, the research project has been developed, the new standard sugar has been synthesized, and the photoluminescence method has been used. 1. Glucosyltransferase (Glucotransferase), glycosyltransferase (Glucotransferase), glucose transfer enzyme (Glycosyltransferase), glucose transfer enzyme (Glucotransferase), glucose transfer enzyme (Glycosyltransferase), glucose transfer enzyme (Glucotransferase), glucose transfer enzyme (Glycosyltransferase), glucose transfer enzyme (Glucotransfer In the process of construction, the interaction between internal and external molecules is based on the use of high sensitivity, high sensitivity, and high sensitivity. The molecular design of the molecular design shows that the new specifications of glucose are sensitive to light. two。 In the production of sugar, there is a good rate of synthesis of the synthetic segment in the part of sugar. In this way, you can use the method of synthesis of new enzymes, which can be used in the synthesis of new enzymes. The results show that the synthesis of sugar-based compounds is effective in the synthesis of various compounds, and the yield is very good. 3. I don't know. To synthesize and use the same segments as well as international ones. In the first place, the results were analyzed in terms of the results of chemical photoluminescence, the use of chemical light, the use of high sensitivity, and the high sensitivity of protein.