生物時計における遺伝子発見リアルタイム計測システムの開発

生物钟基因发现实时测量系统的开发

• 批准号: 09878192
• 负责人: 貴邑 冨久子
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Yokohama City University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09878192/
• 关键词: 生物時計; 生物発光; 不死化細胞

概日リズムをもたらす生物時計は、哺乳類では視交叉上核(SCN)に存在する。今回の研究目的はSCN細胞を神経芽細胞種と細胞融合することによって不死化し、遺伝的、細胞生物学的性質の均一な細胞群(クローン)を得ること、(2)遺伝子発現リズムのリアルタイムモニタリングシステムを開発することを目的に下記の実験を行い、結果を得た。(1)細胞融合法の確立:分散化したマウスのSCN細胞を、神経芽細胞種と細胞融合するための条件を検討したところ、phytohemagglutinin-P(PHA)を含む培地に懸濁し、37Cで10分間incubationした後、ポリエチレングリコールを室温で作用させる方法が一番効率が良く、かつ細胞の生存率も高かった。上記方法で融合した細胞のみを、特殊な倍地で選択し、その後低密度培養することによって、染色体構成や細胞学的性質の均一な細胞群を7クローン得た。(2)レポーター遺伝子としてGreen Fluorescent Protein(GFP)を用いたところ、代謝時間が非常に長く、概日リズムのような繰り返し変動する現象のモニターには不向きであることが解った。次に、レポーター遺伝子として代謝時間の短いLuciferinを用いた。また、培養細胞にtransfection法で遺伝子を導入するのではなく、Luciferin遺伝子の導入されたtransgenic mouseを用いることとした。このマウスを作成したVirginia大学のGene Block博士と共同で、視交叉上核の培養細胞の発光を経時的に測定したところ、概日リズムを示すことが確認された。

In Japan, there is a リズムを リズムを たらす たらす biological timepiece たらす, and in mammals, there is a で suprachiasmatic nucleus (SCN)に. Youdaoplaceholder4. Today back の research purpose は SCN cells を god 経 buds of cell fusion す と る こ と に よ っ て undead し, but 伝, cell biology, properties of uniform の な cells (ク ロ ー ン) を have る こ と, (2) but 伝 発 now リ ズ ム の リ ア ル タ イ ム モ ニ タ リ ン グ シ ス テ ム を open 発 す る こ と を purpose under に の remember be 験 を を い, results Get た. (1) the method of cell fusion の established: diversify し た マ ウ ス の SCN cells を, god 経 buds of cell fusion す と る た め の conditions を beg し 検 た と こ ろ, phytohemagglutinin (PHA) P を containing む petty に clouding し, 37 c で 10 points between incubation し た, ポ リ エ チ レ ン グ リ The first round of action of the させる method が at room temperature で has a が good く and the <s:1> survival rate of cells is high った った. Written method で fusion し た cells の み を, special な times で sentaku し, そ の after low density cultivation す る こ と に よ っ て, even the nature of the chromosome constitute や cytology の な cells を 7 ク ロ ー ン た. (2) レ ポ ー タ ー posthumous son 伝 と し て Green Fluorescent Protein (GFP) を い た と こ ろ, metabolic が very に long く, almost daily リ ズ ム の よ う な Qiao り return し - move す る phenomenon の モ ニ タ ー に は to き で あ る こ と が solution っ た. The <s:1> and レポ タ タ タ タ 伝 remains have a <s:1> short metabolic time <e:1>. <s:1> Luciferinを uses に た た. ま た, culture cell に transfection method で heritage 伝 son を import す る の で は な く, Luciferin but 伝 の import さ れ た transgenic mouse を with い る こ と と し た. こ の マ ウ ス を made し た Virginia university の Gene Block と で together, Dr Suprachiasmatic nucleus の culture cell の 発 light を 経 に determination of し た と こ ろ, almost daily リ ズ ム を shown す こ と が confirm さ れ た.

项目成果

Mitsushima,D.: "The maturation of GABA (A) receptor-mediated control of luteinizing hormone secretion in immature male rats." Brain Res. 748. 258-262 (1997)

Mitsushima,D.：“未成熟雄性大鼠中 GABA (A) 受体介导的黄体生成素分泌控制的成熟。”

Funabashi,T.: "Bicuculine infusion advances the timing of Fos expression in LHRH neurons in the preoptic area of proestrous rats" Neuroreport. 8. 771-774 (1197)

Funabashi,T.：“荷包牡丹碱输注可促进发情前大鼠视前区 LHRH 神经元 Fos 表达的时间”Neuroreport。

Uemura,T.: "Effects of noradrenaline on GnRH-secreting immortalized hypothalamic(GTl-7)neurons." Endocr J. 44. 73-8 (1997)

Uemura,T.：“去甲肾上腺素对分泌 GnRH 的永生化下丘脑 (GTl-7) 神经元的影响。”

Funabashi,T.: "Fos expression by naloxone in LHRH neurons of the mediobasal hypothalamus pentobarbital sodium in the proestrous rat" J Neuroendocrinol. 9. 87-92 (1997)

Funabashi,T.：“发情前大鼠内侧下丘脑戊巴比妥钠的 LHRH 神经元中纳洛酮的 Fos 表达”J Neuroendocrinol。

Mitsushima,D.: "Possible role of the gamma-aminobutyric acid-A receptor system in the timing of the proestrous luteinizing hormone surge in rats" Endocrinology. 138. 1944-1948 (1997)

Mitsushima,D.：“γ-氨基丁酸-A 受体系统在大鼠发情前黄体生成激素激增时间中的可能作用”内分泌学。