グラム陰性菌における消毒薬耐性機構の分子遺伝学的解析

革兰氏阴性菌消毒剂耐药机制的分子遗传学分析

• 批准号: 09877058
• 负责人: 太田 伸
• 金额: $ 1.28万
• 依托单位: Shinshu University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877058/
• 关键词: 消毒剤耐性; クロルヘキシジン; セパシア菌; フルオレッセンス菌; 塩化ベンザルコニウム; 消毒薬耐性; 遺伝子クローニング

(1) 昨年度までにセパシア菌PCJ1株の遺伝子ライブラリーの作成、大腸菌でのCHX(クロルヘキシジン)耐性遺伝子のスクリーニング、セパシア菌CHX感受性変異株での大腸菌-セパシア菌間接合伝達系を用いた耐性遺伝子のスクリーニングを行ったが、様々な理由によりCHX耐性遺伝子をクローン化することができなかった。本年度は、セパシア菌において使える数少ない耐性マーカーであるCp耐性遺伝子をもつ広宿主域プラスミドベクターを用いて新たなPCJ1株遺伝子ライブラリーを作成し、セパシア菌CHX感受性変異株への形質転換によりCHX耐性遺伝子をクローン化することを試みた。遺伝子ライブラリーの作成においてはインサートの挿入効率が悪く、また、接合と同じく形質転換の効率も悪かったため、耐性遺伝子のスクリーニングに十分な数のライブラリーの作成できなかった。この形質転換の効率の低さはセパシア菌のrestriction-modification系によるものと考えられたため、現在いったん形質転換効率の高い大腸菌においてPCJ1株の遺伝子ライブラリーを作成し(約2000クローン)、個々のプラスミドDNAの精製を行っている。今後、コロニーの得るのに十分な量のプラスミドDNAを用いてセパシア菌CHX感受性変異株への形質転換を行い、CHX耐性遺伝子をクローン化する予定である。(2)セパシア菌のCHX耐性の解析と平行して、セパシア菌と同様に消毒剤耐性菌として臨床的に問題となってぃるフルオレッセンス菌(Pseudomonas fluorescence)のBAC(塩化ベンザルコニウム)耐性についての解析を行った。既に分離されているBAC超高度耐性菌の性状を解析した結果、i)BACの吸着量は若干低下してはいるものの、本菌の高度耐性を説明するだけの低下は認められないこと、ii)ゼータ電位測定により、BACの吸着によると考えられる菌体表面陽性電位の異常な亢進が認められた。本菌のBAC耐性の機序として吸着の量ではなく様式の違いが考えられ、また、本菌特有の吸着様式としては通常の陽性の極性基によるものでなく、疎水基を介した吸着様式をとることが示唆された。そこで、本菌の菌体表面の性状を検討したところ、表面の疎水性には感受性菌と比べて大きな違いがなく、陰性荷電が測定感度以下に消失していた.したがって、本菌は菌体表面の陰性荷電を消失させることにより疎水基を介した殺菌効果のない様式でBACを吸着するため、BACに対する超高度耐性を獲得しているものと考えられた。このような耐性機構の存在はこれまでに報告がなく、新規の消毒剤耐性機構であると思われる。

(1) Yesterday annual ま で に セ パ シ ア PCJ1 strains の posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ ー, coliform の で の CHX (ク ロ ル ヘ キ シ ジ ン) patience heritage 伝 son の ス ク リ ー ニ ン グ, セ パ シ ア bacteria CHX sensibility - different strains で の coliform - セ パ シ ア bacteria or indirect を 伝 of department with い た patience heritage 伝 son の ス ク リ ー ニ ン グ を line っ た が, others 々 な By に よ り CHX patience heritage 伝 son を ク ロ ー ン change す る こ と が で き な か っ た. This year は, セ パ シ ア bacteria に お い て make え る number less な い patience マ ー カ ー で あ る Cp patience heritage 伝 son を も つ hiroo host domain プ ラ ス ミ ド ベ ク タ ー を with い て new た な PCJ1 strains heritage 伝 son ラ イ ブ ラ リ ー を し, consummate セ パ シ ア bacteria CHX sensibility - different strains へ の form quality planning in に よ り CHX patience heritage 伝 son を ク ロ ー ン change す る こ と Youdaoplaceholder0 try みた. Posthumous son 伝 ラ イ ブ ラ リ ー の made に お い て は イ ン サ ー ト の scions into sharper rate が 悪 く, ま た, joint と with じ く form quality planning in の sharper rate も 悪 か っ た た め, patience but 伝 の ス ク リ ー ニ ン グ に very な number の ラ イ ブ ラ リ ー の made で き な か っ た. こ の form quality planning in の sharper rate の low さ は セ パ シ ア bacteria の restriction - modification に よ る も の と exam え ら れ た た め, now い っ た ん form quality planning in high rate of unseen の い coliform に お い て PCJ1 strains の heritage 伝 son ラ イ ブ ラ リ ー を made し (about 2000 ク ロ ー ン), a 々 の プ ラ ス ミ ド D NA ₂ refined を lines って って る る. In the future, コ ロ ニ ー の have る の に very な quantity の プ ラ ス ミ ド を DNA with い て セ パ シ ア bacteria CHX sensibility - different strains へ の form quality planning in line を い, CHX patience but 伝 を ク ロ ー ン change す る designated で あ る. (2) セ パ シ ア bacteria の CHX patience の parsing と parallel し て, セ パ シ と ア bacteria with others に disinfection tonic resistant bacterium と し て clinical に problem と な っ て ぃ る フ ル オ レ ッ セ ン ス bacteria (Pseudomonas fluorescence) の BAC (salt ベ ン ザ ル コ ニ ウ ム) patience に つ い て の parsing line を っ た. Both に separation さ れ て い る BAC super high resistant bacterium の traits を parsing し た results, I) BAC の sorption amount は several low し て は い る も の の, this bacterium の highly patience を す る だ け の low は recognize め ら れ な い こ と, ii) ゼ ー タ potentiometric determination of に よ り, BAC の sorption に よ る と exam え ら れ る bacteria positive potential の abnormal な surface Hyperactive が recognize められた. This bacterium の BAC patience の machine sequence と し て sorption amount の で は な く others type の violations い が exam え ら れ, ま た, this fungus characteristic の sorption others type と し て は の usually positive の polarity based に よ る も の で な く, 疎 water-based を interface し た sorption others type を と る こ と が in stopping さ れ た. そ こ で surface, the bacterium の bacteria の traits を beg し 検 た と こ ろ, surface の 疎 water-based に は と susceptibility bacteria than べ て big き な violations い が な く, negative charged が measurement sensitivity に disappear under し て い た. し た が っ て surface, the bacterium は bacteria の negative charged を disappear さ せ る こ と に よ り 疎 water-based を interface し た sterilization services fruit の な い others type で BAC を sorption す Youdaoplaceholder0 and BACに against する hyperpatience を obtained the えられた て る る る <s:1> と と と えられた と と と と と と と えられた test えられた. <s:1> ような resistant institutions <e:1> have ような れまでに report がなく, new regulations <e:1> disinfectant resistant institutions であると think われる.