樹状細胞へのターゲッティングによる新しい呼吸器ウイルスワクチンの開発

通过靶向树突状细胞开发新型呼吸道病毒疫苗

• 批准号: 09877065
• 负责人: 吉田 哲也
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-09877065/
• 关键词: センダイウイルス; IL2融合蛋白抗原; 樹状細胞; ワクチン; 融合蛋白抗原

呼吸器ウイルスの気道粘膜への感染を効果的に防御するためには、血清中のIgG抗体を誘導するのみでは不十分で、分泌型IgA抗体を誘導し、気道内にウイルス特異的IgA抗体が存在することが必要である。気道内で分泌型IgA抗体を誘導するためには、気道粘膜での抗原提示が必要である。本研究では、1.マウス肺炎ウイルスであるセンダイウイルスの感染防御抗原のエンベロープF蛋白とインターロイキン2の融合蛋白を作製し、2.これを抗原として気道粘膜での抗原提示細胞であり、IL-2レセプターを持つ樹状細胞を感作することにより、効率の良い免疫応答が得られるかどうかを検討することを目的とした。初年度では、FとIL-2の融合蛋白遺伝子(dFIL2)を作製し、T7ポリメラーゼ発現系により発現した。発現した蛋白はFとIL-2の両者の抗原性を保持していた。本年度は、マウスを免疫するためにdFIL2蛋白を大量発現する目的で、この融合蛋白遺伝子をバキュロウイルス発現系とセンダイウイルス発現系にそれぞれ組み換えた。しかし、これらの方法でのdFIL2蛋白大量発現はいずれも不成功であった。組み換えバキュロウイルスの発現するdFIL2蛋白は極めて少量で、^<35>S-Metを用いて辛うじて検出できる程度であった。この理由として、発現した融合蛋白のF部分もしくはIL-2部分が、感染細胞にトキシックに働いた可能性が考えられた。センダイウイルスベクターでは、組み換えウイルスは回収できなかった。これはIL-2遺伝子内に存在するセンダイウイルスの終止配列と類似の塩基配列のためという可能性がある。そこでDNAワクチンとして気道内にdFIL2蛋白を発現するため、サイトメガロウイルスエンハンサーとベータアクチンプロモーターを持つ発現ベクター、pCAGGS.MCSへの組み換えを行った(pCAG-dFIL2)。このベクターはクローニングサイトに組み込んだ遺伝子を、サポートウイルスやプラスミド無しに発現できる。pCAG-dFIL2をCV-1細胞にトランスフェクションした結果、dFIL2蛋白を間接蛍光抗体法で検出できた。今後このプラスミドをDNAワクチンとしてマウスでの免疫効果を検討する予定である。

It is necessary to induce IgG antibodies in serum and secretory IgA antibodies in respiratory tract for effective defense against infection of respiratory tract mucosa. Endocrine IgA antibodies are necessary for induction. The purpose of this study is to: 1. prepare fusion protein of F protein and IL-2 protein, which is the antigen defense antigen of pneumonia, 2. prepare antigen and IL-2 protein, which is the antigen prompt cell of intestinal mucosa, and 2. prepare the immune response rate of dendritic cells. At the beginning of this year, the fusion protein of F and IL-2 (dFIL2) was produced and the T7 protein was developed. The antigenicity of IL-2 and F-2 proteins remains unchanged. This year, we are aiming to increase the production of dFIL2 protein in large quantities, and we are aiming to increase the production of dFIL2 protein in large quantities. The method of expression of dFIL2 protein was unsuccessful. DFIL2 protein is expressed in small amounts and in small amounts in the presence of <35>S-Met. The reason for this is that the F part of the fusion protein is found in the IL-2 part, and the possibility of infecting the cell is examined. It's a good idea. The possibility of the termination of the IL-2 gene is discussed. The pCAGGS.MCS is composed of pCAG-dFIL2 and pCAGGS. This is the first time that a child has been born, and the first time that a child has been born, the second time that a child has been born. pCAG-dFIL-2 was detected by indirect light antibody assay in CV-1 cells. In the future, we will discuss the immune effects of the virus.